豬葡萄糖激酶ELISA 試劑盒Porcine GCK ELISA Kit 齊一生物科技(上海)有限公司以真誠、主動、周到、規(guī)范、熱情的服務(wù)很快得到廣大客戶的*好評.公司秉承“適應(yīng)多樣化的需求,提供專業(yè)化的服務(wù)”的經(jīng)營理念,為客戶提供*的服務(wù)
豬葡萄糖激酶ELISA 試劑盒Porcine GCK ELISA Kit需要自備的試劑和器材:
1.37℃恒溫箱。
2.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3.精密移液器及一次性吸頭
4.蒸餾水,
5.一次性試管
6.吸水紙
操作步驟:
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為9mmol/L,6 mmol/L,3 mmol/L,1.5mmol/L, 0.75 mmol/L)。
2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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