熒光定量PCR

熒光定量PCR基本原理 
•  Taqman 技術(shù)：該技術(shù)以美國 ABI 公司為代表。 PCR 擴增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個熒光報告基團和一個熒光淬滅基團，探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收， PCR 儀檢測不到熒光信號； PCR 擴增時（在延伸階段）， Taq 酶的 5' － 3' 外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條 DNA 鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與 PCR 產(chǎn)物形成*同步，這也是定量的基礎(chǔ)所在。

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ABI公司
Taqman探針
MGB探針
Sybr green I染料
ROX染料
Taq酶（熒光定量PCR）
熱啟動酶
熱啟動熒光PCR定量核心試劑盒
一步法RT－PCR試劑盒
TrizolRNA提取試劑
UNG酶
標(biāo)準(zhǔn)品克隆
定點突變
亞克隆
dUTP

•  Beacon 技術(shù)：該技術(shù)以美國人 Tagyi 為代表。也是加入了熒光探針，但它是 環(huán)狀的寡核苷酸探針，分別由莖部和環(huán)部組成， 兩端分別標(biāo)記 熒光報告基團和熒光猝滅基團，在無靶序列的情況下，探針始終是環(huán)狀，報告基團的熒光被猝滅基團猝滅，使熒光檢測儀檢測不到熒光信號；而在有靶序列時，即在 PCR 的退火階段探針與靶序列結(jié)合，使熒光報告基團和猝滅基團分開，這樣熒光儀可以檢測到熒光，熒光信號的強弱代表了靶序列的多少。