枸櫞酸納抗凝馬血
操作步驟
試管法（改良 Mayer 法）
1、致敏羊紅細(xì)胞： 2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素（ 1:2000），混勻，置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清：待測血清 0.2ml，加應(yīng)用液 3.8ml，稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：全溶血管:2%綿羊紅細(xì)胞 2ml 加 8ml 蒸餾水，混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置 37℃水浴 30min， 第 10 管為非溶血對照：補(bǔ)體 CH50 測定試管法
5、結(jié)果測定：取出試管， 2000r/min 離心 10min，對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與 50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計測（波長 542nm、 0.5cm 比色杯） OD 值，
確定與標(biāo)準(zhǔn)管接近者為終點管，然后按下公式計算 CH50 值：
血清補(bǔ)體 CH50（ U/ml） =（ 1/血清用量）×稀釋度。
如第 5 管為終點管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ml。
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常用標(biāo)簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標(biāo)蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標(biāo)簽是由6個組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設(shè)計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用廣泛的一種。
GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)率高，表達(dá)產(chǎn)物純化方便，利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測目的蛋白的表達(dá)和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達(dá)蛋白等。
Myc標(biāo)簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。
HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛運用。
MBP標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端?？捎肕BP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。
其余標(biāo)簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應(yīng)用相對較少。
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