白樺脂醇
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
白樺脂醇
優(yōu)勢:
1.高效,靈敏,特異的抗體
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性
3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高和固相載體
4.適用血清,血漿,組織勻漿液,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液等多種標(biāo)本類型
上海篤瑪生物科技有限公司供應(yīng)的經(jīng)*,以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本,并得到確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。公司專業(yè)提供各種種屬,供應(yīng)的ELISA試劑盒統(tǒng)一價(jià)銷售。
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常用標(biāo)簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白;其純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標(biāo)簽是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小,且較容易分離和純化,是目前使用廣泛的一種。
GST標(biāo)簽體系具有蛋白表達(dá)率高,表達(dá)產(chǎn)物純化方便,利于GST抗體制備的特點(diǎn)。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細(xì)菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測目的蛋白的表達(dá)和分別。GFP抗體不經(jīng)可以檢測GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w,也可以檢測和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達(dá)蛋白的表達(dá),以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達(dá)蛋白等。
Myc標(biāo)簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細(xì)胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質(zhì)的活力,因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。
HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類型,相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛運(yùn)用。
MBP標(biāo)簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá),MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。
其余標(biāo)簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但應(yīng)用相對較少。
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