達(dá)氏疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

以下是達(dá)氏疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

吲達(dá)帕胺 英文名稱：Indapamide 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

鹽酸羥甲唑啉 英文名稱：Oxymetazoline hydrochloride 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

亞葉酸鈣 英文名稱：Calcium folinate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

月桂氮卓酮 英文名稱：Laurocapram 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

硝酸異山梨酯 英文名稱：Isosorbide dinitrate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

消旋山莨菪堿 英文名稱：Racemic Anisodamine 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

魚腥草素鈉 英文名稱：Sodium Houttuyfonate 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

羧甲司坦 英文名稱：Carbocisteine 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

色甘酸鈉 英文名稱：Cromolyn sodium 規(guī)格：：1000mg 保存：：-20℃，避光

雙嘧達(dá)莫 英文名稱：Dipyridamole 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

石杉堿甲 英文名稱：Huperzine A 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

十一酸睪酮 英文名稱：Eleven acid testosterone 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

羥甲豆素 英文名稱：Hymecromone 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

鹽酸士的 英文名稱：Strychnine hydrochloride 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

達(dá)氏疏螺旋體PCR檢測試劑盒說明書大鼠磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3)ELISA Kit  Rat phospho glycogen synthase kinase 3,pGSK-3 ELISA Kit

小鼠肝細(xì)胞生長因子激活物(HGFAC)ELISA Kit  Mouse Hepatocyte growth factor activator,HGFAC ELISA kit

大鼠氧還原蛋白過氧化物酶2(PRDX2)ELISA Kit  Rat Peroxiredoxin 2,PRDX2 ELISA Kit

山羊過氧化氫酶(CAT)ELISA Kit  Goat Catalase,CAT ELISA kit

牛肝脂酶(HL)ELISA Kit  Bovine hepatic lipase,HL ELISA Kit

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA Kit  Mouse matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase,MMP-8 ELISA kit

大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)ELISA Kit  Rat muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit

貓生長激素(GH)ELISA Kit  Cat growth hormone,GH ELISA Kit

人β-肌動蛋白(β-actin)ELISA Kit  Human β-actin ELISA Kit

大鼠肝細(xì)胞生長因子激活物(HGFA)ELISA Kit  Rat hepatocyte growth factor activator,HGFA ELISA Kit

人細(xì)胞周期蛋白A1(CCNA1)ELISA Kit  Human Cyclin-A1,CCNA1 ELISA kit

大鼠整合素α2(ITGA2)ELISA Kit  Rat integrin alpha-2,ITGA2 ELISA kit

犬免疫球蛋白M(IgM)ELISA Kit  Canine Immunoglobulin M,IgM ELISA Kit

人降脂素(Adipsin)ELISA Kit  Human Adipsin ELISA Kit

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。