鉛黃腸球菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

以下是鉛黃腸球菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的相關(guān)產(chǎn)品：

美司坦 英文名稱(chēng)：Mecysteine hydrochloride 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

草烏甲素 英文名稱(chēng)：Bulleyaconitine A 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

氯哌丁 英文名稱(chēng)：Cloperastine hydrochloride 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

愈創(chuàng)甘油醚 英文名稱(chēng)：Guaiacol glyceryl ether 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

賴(lài)氨匹林 英文名稱(chēng)：Lysine acetylsalicylate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

羥喜樹(shù)堿 英文名稱(chēng)：Hydroxy camptothecin 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

異丙安替比林 英文名稱(chēng)：Propyphenazone 規(guī)格：：200mg 保存：：-20℃，避光

異丙托溴銨 英文名稱(chēng)：Ipratropium bromide 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

酸鉀 英文名稱(chēng)：Potassium nitrate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

硫酸雙屈嗪 英文名稱(chēng)：Dihydralazine sulfate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

* 英文名稱(chēng)：Amitriptyline hydrochloride 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

* 英文名稱(chēng)：Fluoxetine hydrochloride 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

甲硝唑雜質(zhì)A（2-甲基-5-硝基咪唑） 英文名稱(chēng)：Metronidazole impurity A (2- methyl -5- nitro imidazole) 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

熒光素鈉 英文名稱(chēng)：Fluorescein sodium 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

鉛黃腸球菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)人唾液酸SA(Human Sialic acid) ELISA Kit 96T

人鞘磷脂SM(Human sphingomyelin) ELISA Kit 96T

人尿游離皮質(zhì)醇UFC(Human urinary free cortisol) ELISA Kit 96T

人硫酸軟骨素CS(Human chondroitin sulfate) ELISA Kit 96T

人硫酸皮膚素DS(Human dermatan sulfate) ELISA Kit 96T

人硫酸角質(zhì)素KS(Human keratan sulfate) ELISA Kit 96T

人硫酸類(lèi)肝素HS(Human heparan sulfate) ELISA Kit 96T

人抗釀酒酵母抗體ASCA(Human Anti-Saccharomyces cerevisiae antibody) ELISA Kit 96T

人遲現(xiàn)抗原4VLA4(Human very late appearing antigen 4) ELISA Kit 96T

人吖啶橙AO(Human Acrine Orange) ELISA Kit 96T

人甲胺喋呤MTX(Human methotrexate) ELISA Kit 96T