人β-防御素1(human defensin-β-1,HBD-1)由上皮細胞分泌,在腫瘤細胞中極少表達,研究表明它可作為腫瘤的抑制基因.本研究制備以人表皮生長因子受體-1(human epidermal growth factor receptor-1,EGFR-1)為靶點、HBD-1(Db)的力達霉素(lidamycin,LDM)組成的強化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db,并探討其抗腫瘤活性.方法 采用基因工程方法制備融合蛋白基因并將其表達純化得到融合蛋白Ec-LDP-Db.ELISA和細胞免疫熒光法檢測Ec-LDP-Db與腫瘤細胞表面EGFR親和活性;采用CCK-8法測定Ec-LDP-Db對人腫瘤細胞A431、A549、H460和PG-BE1體外殺傷活性,純化的Ec-LDP-Db蛋白與LDM發(fā)色團(AE)在體外進行組裝,構(gòu)建強化融合蛋白Ec-LDP(AE)-Db.采用MTT法檢測Ec-LDP(AE)-Db對腫瘤細胞殺傷活性,A431細胞裸鼠移植瘤實驗檢測Ec-LDP(AE)-Db體內(nèi)抗腫瘤活性.流式細胞儀檢測Ec-LDP(AE)-Db作用后腫瘤細胞的細胞周期變化.結(jié)果 成功構(gòu)建并表達融合蛋白Ec-LDP-Db,目的蛋白主要以包涵體的形式存在,目的蛋白Ec-LDP-Db經(jīng)純化、復性后,每升發(fā)酵液可以獲得30 mg,檢測純度達到88％.Ec-LDP-Db可與高表達EGFR的A431細胞表面結(jié)合.不同濃度的HBD-1和Ec-LDP-Db對A431和H460具有增殖抑制作用,其中10μmol/L Ec-LDP-Db組A431細胞抑制率為(67.3±6.9)％,高于HBD-1組抑制率
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