biosharp 脂質(zhì)體2000/Lip2000轉(zhuǎn)染試劑

Lip2000Transfection Reagent

產(chǎn)品簡介：

Lip2000是一種新型的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，適合于將核酸(DNA和RNA)轉(zhuǎn)染至真核細(xì)胞，具有低細(xì)胞毒性、對(duì)多種類型的細(xì)胞都具有高轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。

適用范圍：貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞（哺乳動(dòng)物細(xì)胞系）的轉(zhuǎn)染。

質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染：對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，DNA(µg)與Lip2000(µl)的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。

使用說明：（以 24 孔板為例）

1、細(xì)胞鋪板：

貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用500µl不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.5-2×10⁵ 細(xì)胞，使之第二天能達(dá)到 70-90%匯合。 

懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備 DNA-Lip2000 復(fù)合物之前，用500µl不含抗生素的培養(yǎng)基接種4-8×10⁵細(xì)胞即可。

2、對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作

（1）在離心管里分別加入50µl無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM Ⅰ  培養(yǎng)基） 和 0.8 µg DNA，輕柔混勻，制成DNA稀釋液。

（2）在另一個(gè)離心管里分別加入50µl無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM Ⅰ  培養(yǎng)基）和2.0µl Lip2000（注意用前先混勻），輕柔混勻，制成 Lip2000稀釋液，室溫靜置 5 分鐘。

（3）將 DNA 稀釋液和 Lip2000 稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置 20分鐘，形成DNA-Lip2000 復(fù)合物。DNA-Lip2000 復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在 6 小時(shí)。

3、將 DNA-Lip2000 復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合物分散均勻。

4、在 37℃CO₂ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 4-6 小時(shí)后更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)18-48 小時(shí)

5、如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后將細(xì)胞按照1:10 或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染的優(yōu)化：為達(dá)到*高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可以對(duì) DNA 和 Lip2000 的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，一般在1:0.5~1:5 的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA (µg) 和 Lip2000 (µl) 的比例。

保存條件：

       2-4℃保存一年（避免冷凍）。