簡(jiǎn)要描述：沙門(mén)診斷血清采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)沙門(mén)氏菌血清型特異性基因設(shè)計(jì)引物和探針。PCR擴(kuò)增過(guò)程中，與模板結(jié)合的探針被Taq酶分解產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光定量PCR儀根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)繪制出實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)。
沙門(mén)氏菌抗血清在兔體內(nèi)培育，包括O和H抗血清。Vi抗體為單克隆抗體，在小鼠腹腔液中生成并提取。根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，抗血清可單?dú)或聯(lián)合使用?？寡骞?yīng)規(guī)格為3 ml瓶裝產(chǎn)品（以疊氮hua鈉作為防腐劑）。已通過(guò)吸附排除交叉反應(yīng)。
當(dāng)細(xì)菌培養(yǎng)物與直接針對(duì)細(xì)菌表面成分的特異性抗血清混合時(shí)，細(xì)胞之間將通過(guò)抗原-抗體鍵結(jié)合在一起而形成聚集（凝集）。通常裸眼可以觀察到在懸液中的團(tuán)塊形成。通過(guò)將特異性抗血清與沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物混合，可以確定O和H抗原。根據(jù)觀察到的凝集結(jié)果并結(jié)合Kauffmann-White表1可確定細(xì)菌的血清型。
丹麥SSI沙門(mén)氏菌屬診斷血清試劑盒說(shuō)明書(shū)
步驟通用
將生理鹽水作為陰性對(duì)照，并且其檢測(cè)結(jié)果必須為陰性。如陰性對(duì)照結(jié)果為陽(yáng)性（凝集），則表明菌株發(fā)凝集，即O粗糙型。
與O和H抗血清的玻片凝集
使沙門(mén)氏菌在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)過(guò)夜。半固體瓊脂培養(yǎng)基是zui適用于H分型的培養(yǎng)物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，但如H抗原表達(dá)良好，則可以在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上確定血清型。
1. 將一小滴（約20 μl）抗血清滴在玻片上。
2. 將來(lái)自培養(yǎng)基的一些菌落取樣轉(zhuǎn)移到抗血清液滴中，然后充分混合。培養(yǎng)物的數(shù)量應(yīng)足以產(chǎn)生明顯的乳白色混濁。取樣使用接種環(huán)或牙簽。
3. 將玻片前后傾斜5 – 10秒。
4. 手持玻片在采用暗背景的光源前（間接照明）用裸眼進(jìn)行觀察，讀出反應(yīng)結(jié)果。
5. 陽(yáng)性反應(yīng)為可見(jiàn)凝集。陰性反應(yīng)為保持均一的乳白色混濁。遲發(fā)或較弱的凝集應(yīng)視為陰性結(jié)果。 無(wú)反應(yīng)的原因可能是菌株表達(dá)Vi抗原（見(jiàn)下文）、所用抗血清未能包含待檢菌株的血清型或菌株并非沙門(mén) 氏菌。
Vi 抗原的檢測(cè)
Vi抗原的存在可能干擾或阻止菌株與O抗血清的凝集反應(yīng)。因此對(duì)陰性分離株必須檢測(cè)Vi抗原。因在Vi抗 原中可能形成變異，所以選擇單一菌落是非常重要的，表達(dá)Vi抗原的菌落較Vi陰性菌落的不透光性更強(qiáng)。
在瓊脂平板上的H相誘導(dǎo)（S. Gard方法）2
1. 使半固體瓊脂在微波爐或水浴中融化（100 °C），然后冷卻至45°C。
2. 將100 μl用于相誘導(dǎo)（對(duì)應(yīng)于已經(jīng)確定的相）的H抗血清置于一個(gè)小培養(yǎng)皿的中央。
3. 將10 ml半固體瓊脂倒入抗血清中，最終結(jié)果是形成相誘導(dǎo)血清的1:100稀釋液。
4. 將平板于室溫（22-25°C）下放置10-15分鐘，待其凝固。
5. 用接種環(huán)從瓊脂平板或肉湯培養(yǎng)基中取出一滿(mǎn)環(huán)新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物，接種在平板的中央。
6. 于35-37°C培養(yǎng)一整夜。
7. 在生長(zhǎng)區(qū)域邊緣取培養(yǎng)物用于玻片凝集。使用Kauffmann-White表選用相關(guān)的H抗血清。 如H相誘導(dǎo)未成功，則需考慮增加在半固體瓊脂平板中的抗血清數(shù)量。
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