超聲工業(yè)分散器,VCX 130PB:具有拇指式脈沖發(fā)生器或腳踏開(kāi)關(guān),用于安全處理各種有機(jī)和無(wú)機(jī)材料,從150微升到150毫升。典型應(yīng)用包括生物技術(shù)和藥物加工,包括混合,分散和樣品制備用途。
◆能量監(jiān)視器
◆數(shù)字電表
◆自動(dòng)調(diào)諧
◆拇指式脈沖發(fā)生器
◆遠(yuǎn)程處理能力
◆可變功率輸出控制
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br> | 1、了解超聲細(xì)胞破碎的基本原理 2、掌握超聲細(xì)胞破碎的基本技術(shù) |
實(shí)驗(yàn)原理 | 強(qiáng)聲波作用溶液時(shí),氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān),空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。 |
材料和試劑 | 細(xì)菌10ml、燒杯、刨冰、75%酒精棉球。 |
探頭型號(hào)大小 | 破碎細(xì)胞容量 |
2mm | 150ul-5ml |
3mm | 200ul-10ml |
6mm | 10ml-50ml |
細(xì)胞破碎的方法:
一、機(jī)械破碎法:是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器 等將細(xì)胞破碎開(kāi)來(lái) 。
1. 高速組織搗碎:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至最慢處,開(kāi)動(dòng)開(kāi)關(guān)后,逐步加速至所需速度。此法適用于動(dòng)物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。
2. 玻璃勻漿器勻漿:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來(lái)回研磨,上下移動(dòng),即可將細(xì)胞研碎,此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高,適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
二、物理破碎法:指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎開(kāi)來(lái)。
1:用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動(dòng)力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器)。
機(jī)制:可能與強(qiáng)聲波作用溶液時(shí),氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān),空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
超聲波破碎的效率取決于聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度和細(xì)胞類型等。(使用時(shí)注意降溫,防止過(guò)熱)。
2. 高壓破碎:細(xì)胞懸浮液從高壓室的環(huán)狀隙噴射到靜止的撞擊環(huán)上,被迫改變方向經(jīng)出口管流出。此過(guò)程中細(xì)胞經(jīng)歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化,從而破碎釋放內(nèi)含物。
這是一種溫和的、破碎細(xì)胞的較理想的方法。
3. 反復(fù)凍融法:將細(xì)胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
三、化學(xué)破碎法:指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜,使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
有些動(dòng)物細(xì)胞,例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
四、酶學(xué)破碎法 :選用合適的酶,使細(xì)胞壁遭到破壞,進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開(kāi)來(lái)。
細(xì)菌細(xì)胞壁較厚,可采用處理效果更好。
裂解液標(biāo)準(zhǔn)配方: :50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml。(在這個(gè)pH范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
綜合敘述:無(wú)論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞,都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且應(yīng)該在破碎的同時(shí)多加幾次;另外,還可通過(guò)選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等,使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。
型號(hào) | VCX 130PB |
頻率 | 20KHz |
脈沖激發(fā)裝置 | 手觸調(diào)節(jié)式 |
定時(shí)裝置 | 無(wú) |
變頻器型號(hào) | CV188 |
功率 | 130W |
標(biāo)配變幅桿 | Φ6mm |
標(biāo)配變幅桿長(zhǎng)度 | 113mm |
變幅桿整體尺寸 | 115 x 250 x 320 mm |
變幅桿材質(zhì) | 鈦合金Ti-6Al-4V |
標(biāo)配變幅桿處理能力 | 適用體積10ml至50ml |
可選變幅桿 | Φ2mm,Φ3mm |
變幅桿重量 | 302g |
變幅桿電纜長(zhǎng)度 | 1.5m |
破碎容量 | 0.15-50ml |
占空比 | 1-99% |
功率調(diào)節(jié)范圍 | 連續(xù)可調(diào)(20-130w) |
間隙時(shí)間 | 0.1-99.9s |
溫度保護(hù)設(shè)定 | 無(wú) |
功率振幅顯示 | 有 |
工作頻率范圍 | 能量監(jiān)視器數(shù)字式瓦特計(jì)自動(dòng)調(diào)諧自動(dòng)振幅補(bǔ)償 |
工作時(shí)間 | 基于微處理器的-可編程的10小時(shí)計(jì)時(shí)器1 - 59秒獨(dú)立于/關(guān)閉脈沖 |
工作模式 | 間隙/連續(xù) |
電源 | 220/110V 50Hz/60Hz或者 除非有其他要求,否則電要求以117V、50/60Hz發(fā)送 |
凈重 | 3kg |
主機(jī)+換能器重量 | 3340g |
超聲波發(fā)生器 | 一臺(tái) |
隔音箱 | 選購(gòu) |
電源線 | 一根 |
專用破碎杯 | 選購(gòu) |
使用說(shuō)明書(shū) | 一份 |
使用前注意事項(xiàng):
1.根據(jù)所處理的樣本體積選擇適當(dāng)探頭,使用前后均須用酒精棉球擦洗探頭,換探頭須剛專用扳手更換;
2.AMPLITUDE旋鈕打開(kāi)時(shí),探頭不得在空氣中暴露,特殊情況下(測(cè)試探頭)不應(yīng)超過(guò)10秒;
3.使用前準(zhǔn)備好冰盒,樣品處理時(shí)必須置于冰浴中,樣品濃度不可過(guò)大。