可靠和快速蛋白表達
Bac-to-Bac™ 桿狀病毒表達系統(tǒng)比傳統(tǒng)桿狀病毒表達系統(tǒng)更快且更容易,并且保持高水平的蛋白表達。它基于大腸桿菌中的位點特異性的轉座,而非昆蟲細胞中的同源重組。Bac-to-Bac™ 桿狀病毒表達系統(tǒng)在學術文獻中受到高度重視。自 2000 年以來每年至少有 80 次引用!
傳統(tǒng)桿狀病毒系統(tǒng)需要純化和擴增起始低滴度的病毒上清液。這需要耗時的空斑試驗。然而,Bac-to-Bac™ pFastBac™ 載體與 DH10Bac™ 大腸桿菌感受態(tài)細胞中的親本桿粒重組,以形成表達桿粒。將桿粒轉染至昆蟲細胞,在次轉染中快速產(chǎn)生高滴度的純重組桿狀病毒顆粒。您將節(jié)省數(shù)周珍貴時間。在第 10 天采集純 P2 桿狀病毒儲備液,無需使用繁瑣的噬斑試驗(參見圖 1)
高表達、易于篩選
pFastBac™ 使用強效多角體蛋白啟動子可在各種昆蟲細胞系(如 Sf9、Sf21 和 High Five™ 細胞)中產(chǎn)生高水平的表達。
新添加:
Bac-to-Bac™ pFastBac 載體現(xiàn)在也可以 pFastBacTOPO™ 載體的形式提供。pFastBacTOPO™ 載體是 Blunt™ TOPO™ 載體,隨附 Mach1™-T1R 大腸桿菌,便于克隆和 pFastBac?GOI 增殖。新載體使您能夠:
•使用保真度的 PCR 酶(如 Accuprime™ Pfx SuperMix)擴增您的目的基因 (GOI)。
•TOPO™ 僅需 5 分鐘即可將平末端 PCR 產(chǎn)物克隆到新載體中!
•在氨芐選擇性平板上平板接種后 8 小時可見菌落,因為與其他標準克隆菌株相比,Mach1™-T1R 大腸桿菌細胞具有更快的倍增時間。
•使用 Bac-to-Bac™ N-His TOPO™ 克隆或表達試劑盒,您可以生產(chǎn)一個帶有 TEV 切割位點的 N 端 His 融合蛋白,以使用鎳螯合樹脂(Invitrogen ProBond™ 純化系統(tǒng))進行純化,并使用常用的 Invitrogen AcTEV ™ 蛋白酶輔助生成天然蛋白。
新載體兼具 TOPO™ 克隆技術與高度受到重視的 Bac-to-Bac™ 桿狀病毒表達功能,可實現(xiàn)輕松克隆及高水平的蛋白表達。
pFastBacTOPO™ 載體以克隆和表達試劑盒形式提供。