測序用 TOPO® TA Cloning®試劑盒可提供高效、5 分鐘的一步克隆策略（“TOPO® 克隆”），用于將 Taq 聚合酶–擴增 PCR 產(chǎn)物直接插入至質(zhì)粒載體以進行測序。各試劑盒均使用具有經(jīng)過特殊設(shè)計的測序引物位點（可從各反應(yīng)中獲得更多的插入序列和更少的載體序列）的 pCR™4-TOPO® TA 載體，并可根據(jù)您的需要和預(yù)算，提供多種感受態(tài)細胞或無感受態(tài)細胞。這些試劑盒具有克隆和選擇包含您 PCR 片段的重組載體所需的所有物品。測序用 TOPO® TA 克隆®試劑盒的特點：
• 獲得更多序列—使用標準測序引物時，可獲得更多插入序列和更少載體序列
• 快速且簡便—從 PCR 至克隆僅需 3 步，手動操作時間減至 5 分鐘
• 高效—通過正確插入可獲得高達 95% 的克隆
• 成熟—在過去十年中性能可靠，引用次數(shù)超過 4,000 次
測序用 TOPO® TA Cloning®試劑盒—概述
載體：pCR™4-TOPO® TA 載體—克隆載體經(jīng)過優(yōu)化，可改善測序結(jié)果
克隆方法：TOPO® TA Cloning ®—基于–拓撲異構(gòu)酶 I 的含 3′A 突出端（Taq 擴增）的 PCR 產(chǎn)物與載體的 5 分鐘連接
感受態(tài)細胞：多種選擇—從包含常規(guī)、高效、噬菌體 T1-耐受性或快速生長型感受態(tài)細胞的試劑盒中選擇或使用您自有的細胞
pCR™4-TOPO® TA 載體—針對測序進行優(yōu)化
我們從 pCR™4-TOPO® TA 載體中刪除了大量的多克隆位點，以將測序引物位點與插入位點之間的距離縮短至 33 bp。這意味著測序反應(yīng)具有更少的載體序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO® TA 載體具有適用于 4 種常見測序引物的位點：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。該試劑盒包括各等份試液。
pCR™4-TOPO® TA 克隆選擇和操作
pCR™4-TOPO® TA 載體包含氨芐和抗性標志物以及用于陽性選擇和藍/白斑篩選的 LacZα-ccdB 基因融合。載體的盡可能減少的化多克隆位點仍包括用于克隆 PCR 產(chǎn)物簡化切除的旁側(cè) EcoRI 位點和用于在測序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位點?！疶7 和 T3 啟動子也用于體外轉(zhuǎn)錄。
簡化的基于 TOPO® 的克隆
使用 TOPO® 克隆技術(shù)，無需使用含特異性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、載體制備或其他耗時長的 DNA 操作步驟。只需將 PCR 反應(yīng)物直接添加至提供的拓撲異構(gòu)酶帶電載體中，孵育 5 分鐘，并使用提供的大腸桿菌感受態(tài)細胞進行轉(zhuǎn)化。
高效克隆
攜帶所需插入片段的克隆高達 95%，您可以篩選更少的克隆體，節(jié)省時間和成本。該試劑盒中使用的 pCR™4-TOPO® TA 載體含有 3′T 突出端，用于高效連接含 3′A 突出端的 Taq 擴增 PCR 產(chǎn)物。
克隆標準
在克隆方面，TOPO® 克隆技術(shù)已作為一種可靠技術(shù)供成千上萬的科學家使用達十余年。快速、簡單易用且高效的 TOPO® 克隆已在多種應(yīng)用中應(yīng)用于多種不同載體。
測序用 TOPO® TA Cloning® 試劑盒—試劑盒選項
根據(jù)您的需求，測序用 TOPO® TA Cloning® 試劑盒可與提供不同優(yōu)勢的多種感受態(tài)細胞一起購買：
• 一般克?。?（貨號 K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
• 高效克?。? Electrocomp™ 細胞（貨號K4580-01、K4580-40）
• 一般克隆，噬菌體 T1 抗性：DH5α-T1R（貨號 K4595-01、K4595-40）
• 快速生長：Mach1™-T1R 化學感受態(tài)大腸桿菌（貨號 K4530-20）
• 自行提供：靈活性高且可節(jié)省成本（貨號 450030）
我們還提供另一個版本的試劑盒，包括 PureLink™ 快速質(zhì)粒小提試劑盒（貨號 K4575-02）用于分離清潔、已完成測序的重組質(zhì)粒。
相關(guān)鏈接
• 定制載體構(gòu)建和克隆服務(wù)
• 質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒選擇指南
• PCR 試劑、儀器和耗材
• 獲得更多序列—使用標準測序引物時，可獲得更多插入序列和更少載體序列
• 快速且簡便—從 PCR 至克隆僅需 3 步，手動操作時間減至 5 分鐘
• 高效—通過正確插入可獲得高達 95% 的克隆
• 成熟—在過去十年中性能可靠，引用次數(shù)超過 4,000 次
測序用 TOPO® TA Cloning®試劑盒—概述
載體：pCR™4-TOPO® TA 載體—克隆載體經(jīng)過優(yōu)化，可改善測序結(jié)果
克隆方法：TOPO® TA Cloning ®—基于–拓撲異構(gòu)酶 I 的含 3′A 突出端（Taq 擴增）的 PCR 產(chǎn)物與載體的 5 分鐘連接
感受態(tài)細胞：多種選擇—從包含常規(guī)、高效、噬菌體 T1-耐受性或快速生長型感受態(tài)細胞的試劑盒中選擇或使用您自有的細胞
pCR™4-TOPO® TA 載體—針對測序進行優(yōu)化
我們從 pCR™4-TOPO® TA 載體中刪除了大量的多克隆位點，以將測序引物位點與插入位點之間的距離縮短至 33 bp。這意味著測序反應(yīng)具有更少的載體序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO® TA 載體具有適用于 4 種常見測序引物的位點：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。該試劑盒包括各等份試液。
pCR™4-TOPO® TA 克隆選擇和操作
pCR™4-TOPO® TA 載體包含氨芐和抗性標志物以及用于陽性選擇和藍/白斑篩選的 LacZα-ccdB 基因融合。載體的盡可能減少的化多克隆位點仍包括用于克隆 PCR 產(chǎn)物簡化切除的旁側(cè) EcoRI 位點和用于在測序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位點?！疶7 和 T3 啟動子也用于體外轉(zhuǎn)錄。
簡化的基于 TOPO® 的克隆
使用 TOPO® 克隆技術(shù)，無需使用含特異性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、載體制備或其他耗時長的 DNA 操作步驟。只需將 PCR 反應(yīng)物直接添加至提供的拓撲異構(gòu)酶帶電載體中，孵育 5 分鐘，并使用提供的大腸桿菌感受態(tài)細胞進行轉(zhuǎn)化。
高效克隆
攜帶所需插入片段的克隆高達 95%，您可以篩選更少的克隆體，節(jié)省時間和成本。該試劑盒中使用的 pCR™4-TOPO® TA 載體含有 3′T 突出端，用于高效連接含 3′A 突出端的 Taq 擴增 PCR 產(chǎn)物。
克隆標準
在克隆方面，TOPO® 克隆技術(shù)已作為一種可靠技術(shù)供成千上萬的科學家使用達十余年。快速、簡單易用且高效的 TOPO® 克隆已在多種應(yīng)用中應(yīng)用于多種不同載體。
測序用 TOPO® TA Cloning® 試劑盒—試劑盒選項
根據(jù)您的需求，測序用 TOPO® TA Cloning® 試劑盒可與提供不同優(yōu)勢的多種感受態(tài)細胞一起購買：
• 一般克?。?（貨號 K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
• 高效克?。? Electrocomp™ 細胞（貨號K4580-01、K4580-40）
• 一般克隆，噬菌體 T1 抗性：DH5α-T1R（貨號 K4595-01、K4595-40）
• 快速生長：Mach1™-T1R 化學感受態(tài)大腸桿菌（貨號 K4530-20）
• 自行提供：靈活性高且可節(jié)省成本（貨號 450030）
我們還提供另一個版本的試劑盒，包括 PureLink™ 快速質(zhì)粒小提試劑盒（貨號 K4575-02）用于分離清潔、已完成測序的重組質(zhì)粒。
相關(guān)鏈接
• 定制載體構(gòu)建和克隆服務(wù)
• 質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒選擇指南
• PCR 試劑、儀器和耗材
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