Thermo Scientific 活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒是一種全套試劑盒，能夠通過與 Pak1 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結(jié)合 Cdc42 GTPase。
活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒包含純化的 GST-Pak1 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Cdc42 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Cdc42 活性。
活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒的特點(diǎn)：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Cdc42 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對 Cdc42 檢測進(jìn)行功能檢測，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效
應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Cdc42 GTPase 活化
? 研究絲狀偽足形成期間 Cdc42 的活化
? 監(jiān)測使用生長因子刺激后的 Cdc42 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Cdc42 活性的影響
使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Cdc42 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒的活化 Cdc42 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Cdc42，在存在內(nèi)源性 Cdc42 時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)。GDP 處理使 Cdc42 進(jìn)入 GDP 結(jié)合的非活化狀態(tài)，無論 Cdc42 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號(hào)。對該試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 結(jié)合型二抗（山羊抗小鼠 IgG，產(chǎn)品編號(hào) 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號(hào) 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測。試劑盒所含成分均足夠進(jìn)行 30 次沉降實(shí)驗(yàn)。
Cdc42 背景：
Rho 家族 GTPase 具有許多細(xì)胞功能，包括細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細(xì)胞因子和黏附受體實(shí)現(xiàn)從質(zhì)膜到細(xì)胞溶質(zhì)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質(zhì)修飾來實(shí)現(xiàn)與質(zhì)膜的黏附。Cdc42 活化導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白微絲聚合和絲狀偽足形成。
RhoGTPase 的 Cdc42 亞族與 Rho 和 Rac 家族相比未得到充分表征。Cdc42 和 Rac1 均通過受體激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活化，導(dǎo)致 SAPK 和 p38 應(yīng)激激酶通路激活。中性粒細(xì)胞中的化學(xué)引誘物 fMLP 也激活 Cdc42。纖連蛋白激活 Cdc42 和 Rac1 以誘導(dǎo)細(xì)胞伸展，用 TNF-α 和 IL-1 刺激可導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架發(fā)生變化。Cdc42 和 Rac1 之間存在顯著的交叉串?dāng)_，因?yàn)樗鼈冊谥丿B的通路中起作用，在某些情況下，Cdc42 可能在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中在 Rac1 上游起作用。Cdc42 的某些主效應(yīng)蛋白為 Pak1、N-WASP 和 IQGAP。Pak1 是一種參與 SAPK 應(yīng)激通路中 JNK 活化的激酶。N-WASP 是誘導(dǎo)絲狀偽足形成的效應(yīng)子，IQGAP 與 F-肌動(dòng)蛋白微絲相互作用。在神經(jīng)元分化中，Cdc42 在神經(jīng)突增生中起積極作用。然而，GTPase 的 Rho 家族可在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)期間發(fā)揮激動(dòng)作用以及在分化期間發(fā)揮拮抗作用。
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測定小 GTPase 的激活
活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒包含純化的 GST-Pak1 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Cdc42 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Cdc42 活性。
活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒的特點(diǎn)：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Cdc42 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對 Cdc42 檢測進(jìn)行功能檢測，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效
應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Cdc42 GTPase 活化
? 研究絲狀偽足形成期間 Cdc42 的活化
? 監(jiān)測使用生長因子刺激后的 Cdc42 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Cdc42 活性的影響
使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Cdc42 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒的活化 Cdc42 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Cdc42，在存在內(nèi)源性 Cdc42 時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)。GDP 處理使 Cdc42 進(jìn)入 GDP 結(jié)合的非活化狀態(tài)，無論 Cdc42 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號(hào)。對該試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 結(jié)合型二抗（山羊抗小鼠 IgG，產(chǎn)品編號(hào) 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號(hào) 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測。試劑盒所含成分均足夠進(jìn)行 30 次沉降實(shí)驗(yàn)。
Cdc42 背景：
Rho 家族 GTPase 具有許多細(xì)胞功能，包括細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細(xì)胞因子和黏附受體實(shí)現(xiàn)從質(zhì)膜到細(xì)胞溶質(zhì)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質(zhì)修飾來實(shí)現(xiàn)與質(zhì)膜的黏附。Cdc42 活化導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白微絲聚合和絲狀偽足形成。
RhoGTPase 的 Cdc42 亞族與 Rho 和 Rac 家族相比未得到充分表征。Cdc42 和 Rac1 均通過受體激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活化，導(dǎo)致 SAPK 和 p38 應(yīng)激激酶通路激活。中性粒細(xì)胞中的化學(xué)引誘物 fMLP 也激活 Cdc42。纖連蛋白激活 Cdc42 和 Rac1 以誘導(dǎo)細(xì)胞伸展，用 TNF-α 和 IL-1 刺激可導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架發(fā)生變化。Cdc42 和 Rac1 之間存在顯著的交叉串?dāng)_，因?yàn)樗鼈冊谥丿B的通路中起作用，在某些情況下，Cdc42 可能在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中在 Rac1 上游起作用。Cdc42 的某些主效應(yīng)蛋白為 Pak1、N-WASP 和 IQGAP。Pak1 是一種參與 SAPK 應(yīng)激通路中 JNK 活化的激酶。N-WASP 是誘導(dǎo)絲狀偽足形成的效應(yīng)子，IQGAP 與 F-肌動(dòng)蛋白微絲相互作用。在神經(jīng)元分化中，Cdc42 在神經(jīng)突增生中起積極作用。然而，GTPase 的 Rho 家族可在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)期間發(fā)揮激動(dòng)作用以及在分化期間發(fā)揮拮抗作用。
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測定小 GTPase 的激活
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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