Thermo Scientific Pierce 活性 Rho 沉降和檢測試劑盒能夠通過與 Rhotekin 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結(jié)合 Rho GTPase。
活性 Rho 沉降和檢測試劑盒包括純化的 GST-Rhotekin Rho 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (RBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Rho 抗體、二抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Rho 活性。
活化 Rho 沉降和檢測試劑盒的特點：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性泛抗 Rho 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗證—對 Rho 檢測進(jìn)行功能檢測，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效
應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Rho GTPase 活化
? 研究應(yīng)激纖維形成期間 Rho 的活化
? 監(jiān)測使用生長因子刺激后的 Rho 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Rho 活性的影響
使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Rho 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗證了活化 Rho 沉降和檢測試劑盒的活化 Rho 的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Rho，在存在內(nèi)源性 Rho 時產(chǎn)生強烈信號。GDP 處理使 Rho 進(jìn)入 GDP 結(jié)合狀態(tài)（非活化），無論 Rho 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號。該試劑盒針對使用 HRP 偶聯(lián)的二抗（包括）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（單獨提供，產(chǎn)品編號 34080）進(jìn)行的 Western 印跡檢測進(jìn)行了優(yōu)化。試劑盒均包含足夠用于 30 次沉降實驗的組成部分。
試劑盒組成部分也可用于免疫熒光染色。使用試劑盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Rho 抗體，通過 NGF 刺激神經(jīng)元 NS-1 細(xì)胞以研究活性 Rho 的空間分布。
Rho 背景：
Rho 系列 GTPase 可服務(wù)于許多細(xì)胞功能，包括細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及肌動蛋白細(xì)胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細(xì)胞因子和黏附受體實現(xiàn)從質(zhì)膜到細(xì)胞溶質(zhì)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質(zhì)修飾來實現(xiàn)與質(zhì)膜的黏附。通過 Rho GTPase 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致應(yīng)力纖維中肌動蛋白重組并形成局灶性粘連。RhoA 定位于細(xì)胞溶質(zhì)和質(zhì)膜，而 Rho B 定位于質(zhì)膜和膜囊泡。與 RhoA 類似，RhoC 為細(xì)胞溶質(zhì)，但它定位于核周區(qū)域。
Rho GTPase 與 GEF、GAP、GDI 和效應(yīng)蛋白相互作用進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Rho GTPase 有 30 多種哺乳動物 GEF，每個 GEF 含一個用于核苷酸交換反應(yīng)的 DBl 同源結(jié)構(gòu)域、一個普列克底物蛋白同源結(jié)構(gòu)域和用于蛋白-蛋白相互作用的額外特異性結(jié)構(gòu)域。Rho Gap 蛋白促進(jìn) GTP 水解，GDI 蛋白使細(xì)胞質(zhì)和膜之間的 Rho GTPase 轉(zhuǎn)位，并抑制 Rho GEF 的 GDP/GTP 交換。GEF 和 GDI 與 Rho 和 Gα 亞單元的相互作用是通過 GPCR 進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)所必需的。其中一些效應(yīng)蛋白包括 p160 Rho 激酶（一種參與應(yīng)激纖維形成的/激酶）、p140mDia（可觸發(fā)肌動蛋白細(xì)胞骨架的重組）和 Rhotekin（一種介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以激活 NF-κB 的/激酶支架蛋白）。Rho 家族 GTPase 可在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)期間發(fā)揮激動作用以及在分化期間發(fā)揮拮抗作用。
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測定小 GTPase 的激活
?在神經(jīng)元細(xì)胞分化過程中檢測和定位活性 GTPase
活性 Rho 沉降和檢測試劑盒包括純化的 GST-Rhotekin Rho 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (RBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Rho 抗體、二抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Rho 活性。
活化 Rho 沉降和檢測試劑盒的特點：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性泛抗 Rho 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗證—對 Rho 檢測進(jìn)行功能檢測，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效
應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Rho GTPase 活化
? 研究應(yīng)激纖維形成期間 Rho 的活化
? 監(jiān)測使用生長因子刺激后的 Rho 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Rho 活性的影響
使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Rho 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗證了活化 Rho 沉降和檢測試劑盒的活化 Rho 的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Rho，在存在內(nèi)源性 Rho 時產(chǎn)生強烈信號。GDP 處理使 Rho 進(jìn)入 GDP 結(jié)合狀態(tài)（非活化），無論 Rho 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號。該試劑盒針對使用 HRP 偶聯(lián)的二抗（包括）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（單獨提供，產(chǎn)品編號 34080）進(jìn)行的 Western 印跡檢測進(jìn)行了優(yōu)化。試劑盒均包含足夠用于 30 次沉降實驗的組成部分。
試劑盒組成部分也可用于免疫熒光染色。使用試劑盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Rho 抗體，通過 NGF 刺激神經(jīng)元 NS-1 細(xì)胞以研究活性 Rho 的空間分布。
Rho 背景：
Rho 系列 GTPase 可服務(wù)于許多細(xì)胞功能，包括細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及肌動蛋白細(xì)胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細(xì)胞因子和黏附受體實現(xiàn)從質(zhì)膜到細(xì)胞溶質(zhì)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質(zhì)修飾來實現(xiàn)與質(zhì)膜的黏附。通過 Rho GTPase 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致應(yīng)力纖維中肌動蛋白重組并形成局灶性粘連。RhoA 定位于細(xì)胞溶質(zhì)和質(zhì)膜，而 Rho B 定位于質(zhì)膜和膜囊泡。與 RhoA 類似，RhoC 為細(xì)胞溶質(zhì)，但它定位于核周區(qū)域。
Rho GTPase 與 GEF、GAP、GDI 和效應(yīng)蛋白相互作用進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Rho GTPase 有 30 多種哺乳動物 GEF，每個 GEF 含一個用于核苷酸交換反應(yīng)的 DBl 同源結(jié)構(gòu)域、一個普列克底物蛋白同源結(jié)構(gòu)域和用于蛋白-蛋白相互作用的額外特異性結(jié)構(gòu)域。Rho Gap 蛋白促進(jìn) GTP 水解，GDI 蛋白使細(xì)胞質(zhì)和膜之間的 Rho GTPase 轉(zhuǎn)位，并抑制 Rho GEF 的 GDP/GTP 交換。GEF 和 GDI 與 Rho 和 Gα 亞單元的相互作用是通過 GPCR 進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)所必需的。其中一些效應(yīng)蛋白包括 p160 Rho 激酶（一種參與應(yīng)激纖維形成的/激酶）、p140mDia（可觸發(fā)肌動蛋白細(xì)胞骨架的重組）和 Rhotekin（一種介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以激活 NF-κB 的/激酶支架蛋白）。Rho 家族 GTPase 可在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)期間發(fā)揮激動作用以及在分化期間發(fā)揮拮抗作用。
更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測定小 GTPase 的激活
?在神經(jīng)元細(xì)胞分化過程中檢測和定位活性 GTPase
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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