【檢測原理】
驢源性成分檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)本試劑盒根據(jù)熒光 PCR 技術原理,針對 PCR試劑盒設計特異性引物和 Taqman 探針,通過熒光 PCR 檢測儀進行檢測,從而實現(xiàn)對 PCR試劑盒的檢測。
【儲存條件及有效期】
1.避光-20℃儲存,有效期 12 個月。
2.低溫運輸不能超過 4 天;開封后避光-20℃儲存,對有效期沒有影響。避免反復凍融,凍融 6 次不影響檢測效果。
3.生產日期、有效期至:見外包裝盒。
【適用儀器】
適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動熒光PCR 檢測儀。
【樣本要求】
1.樣本種類:鼻/、痰液、支氣管肺泡灌洗液;培養(yǎng)物等樣品。
2.保存條件:采集的標本應及時送檢,24 小時內檢測的應 4℃保存,超過 24 小時的最好-70℃保存,并避免反復凍融。
3.步驟:②中 55℃時熒光檢測,檢測通道為 FAM。*ABI 系列熒光 PCR 儀不選 ROX 校正,淬滅基團選 None。
4 . 結果分析根據(jù)分析后圖像調節(jié)起止值,(建議起始設在 3~15、終止設在 5~20,同時調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊分析,在報告界面查看結果。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
【質量控制】
1.陰性對照:Ct 值>38 或未檢出。
2.陽性對照:擴增曲線呈 S 型,且 Ct 值≤30。
3.同一實驗以上要求需同時滿足,否則本次實驗視為無效。
4.每種檢測靶標都需設陰陽對照,不同的靶標根據(jù)對應陰性調整基線閾值。
【檢驗方法的局限性】
1.樣品采集、運輸、保存不當,試劑運輸、保存、配置不當都可能會影響實驗結果,甚至會導致假陰性結果。
2.如果實驗室污染、試劑污染、樣品交叉污染,可能出現(xiàn)假陽性結果。
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【結果判讀】
1.FAM 通道檢測。
2.陰性:Ct 值>38 或未檢出。
3.陽性:擴增曲線呈 S 型,且 Ct 值≤35。
4.可疑:擴增曲線呈 S 型,且 35<Ct 值≤38,需復檢;復檢結果若一致,判定結果為陽性。