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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321191 | 磷脂酶D（PLD）測試盒（比色法） | 100管/96樣 |
測定意義
磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰膽水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。
測定原理
磷脂酶D催化水解磷脂酰膽末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽，膽在膽氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安替比和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體102mL×瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1mL無水乙醇充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，4℃避光保存。
酶液提取
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
血清：直接測定。
測定操作
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 | |
試劑一（μL） | 20 | ||
試劑二（μL） | 30 | 30 | 30 |
標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | 20 | ||
樣品（μL） | 20 | ||
試劑三（μL） | 10 | 10 | 10 |
充分混勻，30℃反應(yīng)30min，沸水浴1min，打開蓋子，自然冷卻2min。 | |||
試劑四（μL） | 140 | 140 | 140 |
30℃反應(yīng)30min，于微量石英比色皿/96孔板，空白管調(diào)零，測定500nm處吸光值，分別記為A標(biāo)準(zhǔn)管和A測定管。 | |||
酶活計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /mg prot）= 
×C標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr÷T= 16.7×÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /g 鮮重）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T = 16.7×÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /104 cell）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7×÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /mL）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷T=16.7×
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，500nmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g/mL；T：反應(yīng)時間，30min
用96孔板測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /mg prot）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr÷T= 16.7×÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /g 鮮重）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T = 16.7×÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /104 cell）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7×÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽產(chǎn)生1nmol膽所需的酶量為一個酶活力單位。
PLD活性（nmol/min /mL）= ×C標(biāo)準(zhǔn)÷T=16.7×
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，500nmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g/mL；T：反應(yīng)時間，30min
注意事項
顯色完成后，若有沉淀，于8000rpm，25℃離心5min后取上清測定。
吸光值不宜超過1，否則用試劑一將酶液進行稀釋，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
TLa ELISA Kit | CD15分子ELISA試劑盒 |
Antithrombin(AT)ELISA Kit | Dickkopf相關(guān)蛋白2ELISA試劑盒 |
CXC趨化因子受體1ELISA試劑盒 | F-框蛋白32ELISA試劑盒 |
Epigen蛋白ELISA試劑盒 | Lacritin蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT) 試劑盒 ELISA | 大鼠肝脂mei(HL)試劑盒 ELISA |
甲胎蛋白異質(zhì)體1ELISA試劑盒 | 人載脂蛋白B48(apo-B48)ELISA檢測試劑盒 |
人C型鈉尿肽(CNP)elisa試劑盒 | G抗原1ELISA試劑盒 |
鴨白介su8(IL-8/CXCL8)試劑盒ELISA | 鴨腺病毒PCR試劑盒（暫停） |
雞傳染性貧血病毒PCR試劑盒 | 雙歧桿菌PCR檢測試劑盒 |
小鼠乳腺瘤病毒RT-PCR試劑盒 | 薩比亞病毒RT-PCR試劑盒 |
三日瘧原蟲PCR檢測試劑盒 | 雞痘病毒PCR試劑盒 |
活動錐蟲PCR檢測試劑盒 | CXCR3 大鼠CXC趨化因子受體3ELISA檢測試劑盒 |
C3 大鼠補體蛋白3ELISA檢測試劑盒 | 雞傳染性支氣管炎病毒PCR檢測試劑盒 |
C/EBPδ 人CCAAT增強子結(jié)合蛋白δELISA檢測試劑盒 | 獸疫鏈球菌PCR檢測試劑盒 |
血小板反應(yīng)蛋白解整合su金屬肽7(ADAMTS7)ELISA試劑盒 | B細(xì)胞連接蛋白(BLNK)ELISA試劑盒 |
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