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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS63217 | NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒（比色法） | 100管/96樣 |
AS63217 | NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒（比色法） | 50管/48樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理：
NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP，在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入5mL蒸餾水，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
將勻漿600g，4℃離心5min。
棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11100g，4℃離心10min。
上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的NOX（此步可選做）。
步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于NOX活性測(cè)定。
血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至600nm，蒸餾水調(diào)零。
樣本測(cè)定
（1）試劑四于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五，混勻，記錄600nm處20s時(shí)吸光值A(chǔ)1和 1min20s后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
NOX活力單位的計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）NOX活力的計(jì)算:
單位的定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=2500×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.25mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
1、血清（漿）NOX活力的計(jì)算:
單位的定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=5000×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T=2.02×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.25mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
D2D ELISA Kit | 2',5'-寡腺苷酸合成酶3ELISA試劑盒 |
anti-CCP antibody ELISA Kit | AF4/FMR2家族成員1ELISA試劑盒 |
Ⅱ型前膠原ELISA試劑盒 | B-黑色素瘤抗原2ELISA試劑盒 |
Atlastin2蛋白ELISA試劑盒 | CopineⅧ蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 大鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)試劑盒 ELISA |
11-β-羥基類固醇脫氫酶3ELISA試劑盒 | 豬促生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)檢測(cè)試劑盒elisa |
AFc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA試劑盒 | CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白γELISA試劑盒 |
豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒elisa | 豬鏈球菌2型PCR試劑盒 |
肝片吸蟲(chóng)病通用PCR試劑盒 | 文氏密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒 |
鼻氣管炎鳥(niǎo)桿菌PCR試劑盒 | 胎兒三毛滴蟲(chóng)PCR試劑盒 |
足馬杜拉分枝菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 革蜱PCR試劑盒 |
兔出血癥病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | VE 大鼠EELISA檢測(cè)試劑盒 |
Atlastin1蛋白(ATL1)ELISA試劑盒 | 肝 壞死性PCR試劑盒 |
AT-Ⅲ 大鼠抗Ⅲ抗體ELISA檢測(cè)試劑盒 | 委內(nèi)瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
乙醇脫氫4(ADH4)ELISA試劑盒 | ASD 人雄烯二酮ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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