【適用儀器】
適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動(dòng)熒光PCR 檢測(cè)儀。
【檢測(cè)原理】
牛布氏桿菌(BS)檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)本試劑盒根據(jù)熒光 PCR 技術(shù)原理,針對(duì) PCR試劑盒設(shè)計(jì)特異性引物和 Taqman 探針,通過(guò)熒光 PCR 檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì) PCR試劑盒的檢測(cè)。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1.避光-20℃儲(chǔ)存,有效期 12 個(gè)月。
2.低溫運(yùn)輸不能超過(guò) 4 天;開(kāi)封后避光-20℃儲(chǔ)存,對(duì)有效期沒(méi)有影響。避免反復(fù)凍融,凍融 6 次不影響檢測(cè)效果。
3.生產(chǎn)日期、有效期至:見(jiàn)外包裝盒。
【樣本要求】
1.樣本種類(lèi):鼻/、痰液、支氣管肺泡灌洗液;培養(yǎng)物等樣品。
2.保存條件:采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送檢,24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的應(yīng) 4℃保存,超過(guò) 24 小時(shí)的最好-70℃保存,并避免反復(fù)凍融。
3.步驟:②中 55℃時(shí)熒光檢測(cè),檢測(cè)通道為 FAM。*ABI 系列熒光 PCR 儀不選 ROX 校正,淬滅基團(tuán)選 None。
4 . 結(jié)果分析根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)起止值,(建議起始設(shè)在 3~15、終止設(shè)在 5~20,同時(shí)調(diào)整陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線(xiàn)平直或低于閾值線(xiàn)),點(diǎn)擊分析,在報(bào)告界面查看結(jié)果。
【結(jié)果判讀】
1.FAM 通道檢測(cè)。
2.陰性:Ct 值>38 或未檢出。
3.陽(yáng)性:擴(kuò)增曲線(xiàn)呈 S 型,且 Ct 值≤35。
4.可疑:擴(kuò)增曲線(xiàn)呈 S 型,且 35<Ct 值≤38,需復(fù)檢;復(fù)檢結(jié)果若一致,判定結(jié)果為陽(yáng)性。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1.樣品采集、運(yùn)輸、保存不當(dāng),試劑運(yùn)輸、保存、配置不當(dāng)都可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,甚至?xí)?dǎo)致假陰性結(jié)果。
2.如果實(shí)驗(yàn)室污染、試劑污染、樣品交叉污染,可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
【質(zhì)量控制】
1.陰性對(duì)照:Ct 值>38 或未檢出。
2.陽(yáng)性對(duì)照:擴(kuò)增曲線(xiàn)呈 S 型,且 Ct 值≤30。
3.同一實(shí)驗(yàn)以上要求需同時(shí)滿(mǎn)足,否則本次實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
4.每種檢測(cè)靶標(biāo)都需設(shè)陰陽(yáng)對(duì)照,不同的靶標(biāo)根據(jù)對(duì)應(yīng)陰性調(diào)整基線(xiàn)閾值。
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