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產(chǎn)品名稱:大鼠apelin 12(AP12)ELISA試劑盒
規(guī)格:48T/96T
英文名稱:Rat apelin 12,AP12 ELISA Kit
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操作步驟:
用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照)
于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml, 37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫 酸0.05ml。
檢測方法:
(1)檢測抗原 zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法,其次是競爭法。但競爭法在具體實(shí)驗(yàn)中有些困難,特別是檢測微生物的抗原,因?yàn)樾枰獦?biāo)記抗原,這對于某些抗原是很難做到的,甚至是不可能的。另外在競爭法中,酶標(biāo)記的抗原與標(biāo)本直接混合在一起,許多標(biāo)本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì),可影響ELISA的結(jié)果。
(2)檢測抗體 檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法,這個(gè)方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個(gè)方法的*步是捕獲所需要檢測的一個(gè)種類的抗體,接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時(shí)比較簡單,但不適用于檢測其他種類的抗體,因?yàn)檠逯腥绻刑禺怚gG存在將與IgM或IgA等競爭結(jié)合抗原。
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