雞白介素1（IL-1）ELISA檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗法）

雞白介素1（IL-1）ELISA檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗法） Chicken Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit
 
 
 
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操作步驟
1.標準品的稀釋：準備小試管6只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0號標準品。稀釋后各管濃度分別是：320 pg/ml,160 pg/ml,80 pg/ml,40 pg/ml,20pg/ml,0 pg/ml。
在酶標包被板上設(shè)標準品孔，依次加入不同濃度的標準品50ul（建議每個濃度做2個平行孔）。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品、酶標試劑及生物素標記的抗IL-6抗體，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl，然后再加生物素標記的抗IL-6抗體10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行

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