產(chǎn)品簡介
DNA 退火緩沖液（5×）江苑生物，即 DNA 寡核苷酸退火緩沖液，該退火緩沖液不僅可以用于常規(guī) DNA Oligos 的退火，而且特別適合于較難退火的構建 RNAi（siRNA 和 shRNA） 質粒的 DNA Oligos，可以有效避免 DNA Oligos 自身形成發(fā)夾結構，并且兩條 Oligos 退火后可以直接和經(jīng)酶切純化的質粒連接。通常轉化后可以得到大量的陽性克隆。
保存條件
常溫配送。一個月內(nèi)，4 oC 保存。-20 oC 長期保存，至少1年有效。
注意事項
1. DNA 退火緩沖液（5×）只適合于 DNA Oligos 的退火，不能用于 RNA Oligos 的退火。
2. 本產(chǎn)品僅用于科學研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
使用說明
1.將 Oligos 干粉用雙蒸水配制成 50 µM，融化 DNA 退火緩沖液（5×） ，混勻備用。
2.配置如下退火反應體系，混勻。
Nuclease-Free Water 40 µL
DNA 退火緩沖液（5×） 20 µL
DNA Oligo A (50 μM) 20 µL
DNA Oligo B (50 μM) 20 µL
總體積 100 µL
3.退火方法一： 將退火反應體系置于 PCR 儀中， 設置反應條件： 95℃變性 2 min， -1℃/30s/cycle 緩慢降溫至 25℃。 程序設置以 Bio-Rad 的 T100 為例為： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。
對于易形成發(fā)卡結構的 Oligos 可以延長時間降溫時間： 95℃變性 2 min， -1℃/90s/cycle 緩慢降溫至25℃。 程序設置以 Bio-Rad 的 T100 為例為： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。
4.退火方法二： 將退火反應體系放于 95°C 水浴鍋或金屬浴， 持續(xù) 2 min，后將退火反應體系置于一杯 95°C的水中，讓其自然冷卻至室溫。 若是易形成發(fā)卡結構的 Oligos，可以將95°C 水放于保溫杯中開蓋降溫。
Note： 緩慢降溫對形成正確的結構是非常有幫助的，降溫過快將導致錯誤結構的產(chǎn)生。
5.退火結束后可直接用于連接反應，也可以-20oC 凍存?zhèn)溆谩?若進行酶切等其它反應，更好用純化試劑盒進行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應體系中體積不超過 5%，以避免退火緩沖液對后續(xù)酶反應體系的干擾。
6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
