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親和層析填料的應(yīng)用原理及其優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)分析

閱讀:1266      發(fā)布時(shí)間:2022-8-1
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  親和層析填料是利用生物大分子的生物學(xué)特異性,即生物分子間所具有的專(zhuān)一性親和力而設(shè)計(jì)的層析技術(shù)。例如抗原和抗體、酶和酶抑制劑(或配體)、酶蛋白和輔酶、激素和受體等之間有一種特殊的親和力,在一定條件下,它們能緊密地結(jié)合成復(fù)合物。如果將復(fù)合物的一方固定在不溶性載體上,則可從溶液中專(zhuān)一地分離和提純另一方。與上述其他純化方法相比,親和層析能產(chǎn)生相當(dāng)高的純化作用。另外,此法的優(yōu)點(diǎn)是迅速,有時(shí)僅一步即可達(dá)到純化的目的。
  親和層析填料優(yōu)點(diǎn):
  1.親和層析法是分離蛋白質(zhì)的一種極為有效的方法,它經(jīng)常只需經(jīng)過(guò)一步處理即可使某種待提純的蛋白質(zhì)從很復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中分離出來(lái),而且純度很高。
  2.是有效的生物活性物質(zhì)純化方法,它對(duì)生物分子選擇性的吸附和分離,可以取得很高的純化倍數(shù)。此外蛋白在純化過(guò)程中得到濃縮,結(jié)合到親和配基后,性質(zhì)更加穩(wěn)定,其結(jié)果提高了活性回收率。此外它可以減少純化步驟,縮短純化時(shí)間,對(duì)不穩(wěn)定蛋白的純化十分有利。
  3.除特異性的吸附外,仍然會(huì)因分子的錯(cuò)誤認(rèn)別和分子間非選擇性的作用力而吸附一些雜蛋白質(zhì),另洗脫過(guò)程中的配體不可避免的脫落進(jìn)入分離體系。
  親和層析填料正確地選擇合適的配體以及合適的結(jié)合方式,對(duì)獲得具有優(yōu)良分離效果和較大容量的載體同樣具有重要作用。能與分離物質(zhì)牢固、特異和可逆結(jié)合的物質(zhì)都可以作為配體。選擇配體有兩個(gè)條件:第一是生物大分子與配體間具有合適的親和力,親和力太強(qiáng),洗脫條件劇烈,易造成生物大分子失活,親和力太小,解離容易,結(jié)合率不高。第二是配體要具有雙重功能,既有可牢固與載體結(jié)合的基團(tuán),結(jié)合后又不影響生物大分子與配體間的親和力。

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