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親和層析填料有良好的耐堿清洗性能

閱讀:360      發(fā)布時間:2022-10-24
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  親和層析填料是利用生物大分子與某些相對應的專一分子特異識別和可逆結合的特性而建立起來的一種分離生物大分子的層析方法。親和層析是分離蛋白質的一種及有效的方法,常只需一步處理即可得到純度較高的某種蛋白質。它是根據(jù)不同蛋白質對特定配體的特異而非共價結合的能力不同進行蛋白質分離的一種層析方法。
  親和層析填料特性:
  1.對抗體有高度結合力
  2.極低的ProteinA流失率
  3.良好的耐堿清洗性
  4.好的耐蛋白酶降解能力
  5.高批間重復性
  6.高蛋白質回收率,并保持樣品生物活性
  親和層析填料是根據(jù)目標蛋白和層析基質上的特定配基發(fā)生可逆性地相互作用而進行分離的一種技術。這種相互作用既可以是特異性的(如抗體與proteinA或proteinG的結合),也可以是非特異性的(如組氨酸標簽蛋白與金屬離子的結合)。
  有很多種類型的生物學相互作用應用于親和層析中,如配體-底物、蛋白-蛋白、核酸-蛋白等。親和層析過程一般包括平衡、上樣、清洗、洗脫四個階段。平衡主要是將柱子平衡至有利于樣品與填料配基結合的環(huán)境下,然后進行上樣。洗脫可以是特異性的(如競爭性配基分子),也可以是非特異性的(如改變pH或離子強度)。親和層析具有高選擇性優(yōu)勢,通常一步親和層析就可以獲得高純度的產品。但需要更高的純度時,需要添加一步或多步純化步驟,比如使用凝膠過濾層析進行/后的精純。

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