如果您采用真核表達系統(tǒng)，需要將發(fā)酵液直接上柱純化；亦或是樣品中含有EDTA等還原劑，該如何應(yīng)對？百林科全新一代親和填料Ni Chromstar Excel助您快速通關(guān)！這款產(chǎn)品耐受100mM EDTA，適用于真核分泌表達的His標(biāo)簽蛋白純化，眾多優(yōu)勢如虎添翼。
關(guān)于His標(biāo)簽
His標(biāo)簽由多個組氨酸殘基構(gòu)成(6個最為常見)，由于組氨酸上的N原子能夠與某些過渡金屬離子形成配位鍵，利用這一特性，可以使用含有金屬離子配基的填料來捕獲和純化His標(biāo)簽重組蛋白。其特點如下：
?? 分子量小，基本不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。
?? 組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)構(gòu)，可以結(jié)合二價金屬離子，咪唑和組氨酸標(biāo)簽競爭性的結(jié)合在二價金屬離子上，加入高濃度的咪唑即可將組氨酸標(biāo)簽蛋白洗脫下來。
?? 具有成本低、易表達等特點，是目前最為常用的蛋白標(biāo)簽。
鎳柱親和層析原理
通常大家所接觸的IDA、NTA和TED的不同螯合形式，就是基于鎳離子的不同螯合策略實現(xiàn)。鎳離子為六價，IDA偶聯(lián)需要占用其三個位點，還剩余三個位點結(jié)合His標(biāo)簽；第二種偶聯(lián)方式NTA則是占據(jù)鎳離子的四個位點，剩余兩個位點結(jié)合His標(biāo)簽；而第三種方式TED偶聯(lián)則需要占據(jù)五個位點，剩余1個位點結(jié)合His標(biāo)簽。
占據(jù)位點越多則鎳離子被抓的越“牢固”，載量會相應(yīng)的降低，若蛋白樣品中有高濃度的螯合劑如EDTA等，則需要選擇TED偶聯(lián)的鎳填料，減少鎳離子的脫落。
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| IDA | NTA | TED |
百林科在標(biāo)簽蛋白純化領(lǐng)域擁有種類廣泛、質(zhì)量優(yōu)異的Ni系列產(chǎn)品。今天，我們將為大家重點介紹百林科層析填料新品——Ni Chromstar Excel。
這是一款親和層析介質(zhì)，將過渡金屬離子 Ni2+ 預(yù)先螯合在以 TED為配基的 Chromstar 基架上制成。 該層析介質(zhì)利用 Ni2+ 與蛋白質(zhì)上某些氨基酸(主要是組氨酸)的側(cè)鏈之間的相互作用，實現(xiàn)含有與不含有 這些氨基酸、含有這些氨基酸數(shù)量多與少的蛋白質(zhì)的分離純化，具有明顯優(yōu)勢：
?? 耐受 100 mM EDTA
?? 應(yīng)用于分泌真核培養(yǎng)液上清中的組氨酸蛋白的捕獲或純化
?? >10 mg 組氨酸標(biāo)簽蛋白 /ml 層析介質(zhì)
?? 耐受堿洗，無需脫鎳掛鎳，有效避免交叉污染
?? 一步純度可達90%以上
?? 較好的批間一致性
圖1: Ni Chromstar Excel系列產(chǎn)品
應(yīng)用案例--
含100 mM EDTA的耐受測試
測試條件
• 樣品信息：含100 mM EDTA的His蛋白上清液
• 層析柱：0.77*10 cm，4.7ml
• Buffer A: 20mM PB, 0.5M Nacl, 20mM 咪唑
• Buffer B: 20mM PB, 0.5M NaCl, 500mM 咪唑
圖2：Ni Chromstar Excel 層析圖譜
圖3：Ni Chromstar FF層析圖譜
圖4：Ni Chromstar Excel膠圖
圖5：Ni Chromstar FF膠圖
圖6：使用后，Ni Chromstar Excel(左側(cè))顏色無變化，Ni Chromstar FF(右側(cè))藍色基本消失
表1：數(shù)據(jù)匯總
SUMMARY
以上峰圖和膠圖可見，Ni Chromstar Excel較FF相比，能夠耐受100 mM EDTA，一步捕獲純度達到90%，性能表現(xiàn)優(yōu)異，洗脫后層析柱較使用前無顏色變化。
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