提到抗體純化工藝，就不得不提被廣泛使用的經(jīng)典三步法：親和捕獲+陽離子交換+陰離子交換。今天，重點跟大家聊一聊其中的第三步--陰離子交換層析介質。
陰離子交換層析介質，主要在整個工藝過程中起到去除聚體、蛋白A配基脫落、病毒、內毒素、HCD以及HCP等。
通常情況下，陰離子交換層析會采用流穿的形式，即抗體在上樣過程中穿透，雜質吸附在層析介質上。根據(jù)抗體分子等電點的不同，選擇合適的緩沖液pH條件，控制抗體流穿，DNA、內毒素及病毒等吸附在層析介質上。
百林科陰離子交換層析介質家族中的MaXtar Q 是一款強陰離子交換層析介質，利用不同分子在特定條件下電荷性質和多少的差異對其進行分離。
該層析介質能很好的用于多種生物分子的分離純化，比如：重組蛋白、抗體、核酸、病毒及類病毒顆粒、多糖等。
相比于傳統(tǒng)的強陰離子交換層析介質，MaXtar Q表現(xiàn)出更優(yōu)的性能：
01 改良的 MaXtar 基架具有更強剛性，因此在較低的反壓下能夠實現(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率。
02 通過升級配基偶聯(lián)方式，提高層析介質的動態(tài)結合載量。
參數(shù)介紹
* 動態(tài)載量的測量條件：裝柱高度：10cm，測試流速600cm/h，測試緩沖液：0.05M Tris-HCl溶液，pH8.0，測試樣品：6mg/ml的BSA樣品，當BSA的穿透量達到10%時，單位介質體積(ml)的BSA上樣量 (mg)。
** 層析介質在40℃，pH2-14環(huán)境下放置7天后，其理化性質和功能沒有明顯變化。
*** v/v，體積比。
應用案例-- MaXtar Q進行抗體精純
層析柱：Chrom-LinX 10/400P，柱高20cm
樣品：抗體親和洗脫液，調節(jié)pH為6.96
載量：200 mg/mL
平衡緩沖液：30 mM PB，pH 7.0
再生緩沖液：30mM PB，1M NaCl，pH 7.0
保留時間：6 min
圖1 MaXtar Q層析圖譜
表1 MaXtar Q層析結果
小結：MaXtar Q在抗體純化中有較好的工藝表現(xiàn)。
基于法規(guī)中“對純化用材料(如層析柱填料)的重復使用的可接受程度進行驗證”的要求，以及越來越多的使用人員提出CIP對層析介質的重復使用影響的需求，選擇常用的陰離子交換介質MaXtar Q進行了150個循環(huán)的模擬驗證，驗證條件采用酸+鹽、堿交替的形式，綜合考察CIP對其性能(動態(tài)結合載量及功能)的影響。
實驗條件如下：
層析柱：Chrom-Screen MaXtar Q 4.7ml；10 cm
樣品：BSA(動態(tài)結合載量)；β-乳球蛋白B和A(功能)
平衡緩沖液：20 mM PB，0.07M NaCl，pH6.2
CIP1：1M HAc，1M NaCl，pH3.0
CIP2：1 M NaOH，pH14
沖洗：純化水
保留時間：6 min
圖2 不同循環(huán)測試MaXtar Q的動態(tài)結合載量表現(xiàn)
圖3 不同循環(huán)測試MaXtar Q的功能表現(xiàn)
圖4 不同循環(huán)MaXtar Q的功能疊加圖譜
綜上，考慮到測試實驗誤差(RSD<5%)，150個循環(huán)后，MaXtar Q的動態(tài)結合載量及功能(標準蛋白出峰體積)沒有明顯差異。
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