踏上純化之路,往往就要面對層析填料的選擇:填料類型、基架、配基、粒徑的不同….而在百林科層析填料家族中,有這么一類親和填料:團(tuán)隊(duì)成員雖少,利用好可以展現(xiàn)強(qiáng)大作用,它們就是預(yù)活化填料,其可以根據(jù)項(xiàng)目類型選擇抗體、抗原、酶、小核酸或者多肽作為親和配基,純化能與之結(jié)合的相應(yīng)的配體。
面對不同類型預(yù)活化填料的選擇,往往讓大家迷茫,今天重點(diǎn)跟純化小伙伴們聊一聊,如何選擇預(yù)活化填料?
百林科不同類型預(yù)活化填料基本介紹
01 CNBr activated Chromstar 4FF
CNBr activated Chromstar 4FF預(yù)活化親和填料,通過生物分子之間的特異性的相互作用進(jìn)行分離純化,該填料常用于偶聯(lián)含氨基的高分子量配基。CNBr activated Chromstar 4FF 可實(shí)現(xiàn)含氨基蛋白配基多點(diǎn)連接,從而減少配基脫落,增加層析介質(zhì)穩(wěn)定性。
02 NHS activated Chromstar 4FF
NHS activated Chromstar 4FF預(yù)活化親和填料,通過生物分子之間的特異性的相互作用進(jìn)行分離純化。該填料常用于偶聯(lián)小分子蛋白或多肽,擁有穩(wěn)定性強(qiáng)的性能:與游離氨基快速結(jié)合,含有間隔臂,共價(jià)鍵化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng);耐受較高的pH。
03 Epoxy-activated Chromstar 6B
Epoxy-activated Chromstar 6B 是一款瓊脂糖基架的預(yù)活化親和填料,可以通過配基上的羥基、氨基或巰基等基團(tuán),進(jìn)行偶聯(lián),以此形成特定的親和層析介質(zhì),其擁有長親水間隔臂,特別適用偶聯(lián)小分子配基。
圖1:百林科不同規(guī)格填料
關(guān)于 NHS 和 CNBr 的選擇?
實(shí)際應(yīng)用中,經(jīng)常碰到NHS 和 CNBr 如何選擇的問題,兩款預(yù)活化填料最主要的區(qū)別是 :
01 NHS 預(yù)活化填料的反應(yīng)位點(diǎn)與填料基架之間有間隔臂,而 CNBr 則沒有。當(dāng)需要結(jié)合的樣品是蛋白質(zhì)等生物大分子時,建議選擇NHS預(yù)活化填料,這樣可以降低由于空間位阻帶來的不利影響。
02 NHS能耐受較高的pH值,在pH 13時仍然非常穩(wěn)定,而NHS共價(jià)鍵化學(xué)穩(wěn)定性比CNBr高, 一般情況下,NHS 可以替代 CNBr 的應(yīng)用。
偶聯(lián)原理和注意事項(xiàng)
配基是通過其功能基團(tuán)的反應(yīng)偶聯(lián)到基質(zhì)上,因此偶聯(lián)方法的選擇取決于配基的特性。NHS或者CNBr填料通過配基的伯胺基團(tuán)進(jìn)行偶聯(lián), Epoxy利用羥基、氨基或者巰基通過長親水間隔臂進(jìn)行偶聯(lián),一般偶聯(lián)糖類物質(zhì)居多。
在偶聯(lián)過程中,由于偶聯(lián)方式是針對某一個功能基團(tuán)進(jìn)行的,因此在準(zhǔn)備配基的溶液時,需要注意,選擇的緩沖液不能含有類似的功能基團(tuán)離子,例如,在使用NHS填料時,緩沖液不能是Tris這類帶氨基基團(tuán)的緩沖液,否則緩沖液中大量的氨基基團(tuán)會偶聯(lián)至填料上。偶聯(lián)時盡量選擇高純度的配基,以減少非特異性結(jié)合。不同配基偶聯(lián)條件不同,具體請參考說明書中的內(nèi)容。
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