立冬時(shí)節(jié)，雖然天氣漸冷，然而實(shí)驗(yàn)人員火熱的工作熱情卻絲毫未減。最近常聽到實(shí)驗(yàn)人員各種各樣的抱怨：怎么最近做的疏水層析結(jié)果不如之前的好了？怎么重復(fù)不出來之前的結(jié)果了呢？今日的疏水小課堂可以救急哈。
在前期的純化小技巧中，我們就提到過去除抗體變體的有效手段--疏水層析介質(zhì)。疏水層析介質(zhì)對樣品和雜質(zhì)的分離主要基于層析介質(zhì)的疏水性、被分離物質(zhì)的性質(zhì)和組成、表面暴露的疏水性基團(tuán)的分布和結(jié)合緩沖液中鹽的類型及濃度等。
影響疏水層析介質(zhì)純化效果的主要因素有：層析介質(zhì)的性質(zhì)(基架類型、結(jié)構(gòu)、配基密度等)，緩沖液的組成(平衡和洗脫緩沖液中鹽的類型、濃度、pH值、溫度)，料液的性質(zhì)和樣品的其他成分等。
那我們想到，在這些影響因素中，實(shí)驗(yàn)人員在重復(fù)疏水層析的時(shí)候，是不是忽略了其中的哪個(gè)呢？考慮到最近的降溫，我們第一個(gè)想到的就是溫度。
通常情況下，溫度對層析過程的影響比較復(fù)雜，蛋白質(zhì)與疏水層析介質(zhì)的結(jié)合是熵驅(qū)動的。故而，當(dāng)溫度降低的時(shí)候，蛋白質(zhì)與層析介質(zhì)的相互作用會降低，范德華力也降低。
百林科可以提供包括MaXtar基架和Chromstar基架在內(nèi)的不同粒徑的疏水層析介質(zhì)。針對不同的實(shí)驗(yàn)需求，也有丁基Butyl、辛基Octyl、苯基Phenyl等不同疏水性配基的搭配。
鑒于溫度會影響疏水相互作用，在下游純化工藝開發(fā)及后續(xù)放大生產(chǎn)中，應(yīng)當(dāng)充分考慮樣品溫度的一致性：在研發(fā)階段，當(dāng)上樣量比較小時(shí)，樣品從冷凍狀態(tài)取出，僅需很短時(shí)間即可恢復(fù)至室溫；而上到大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，樣品則需要更長的時(shí)間才可復(fù)溫。
應(yīng)用案例
疏水層析介質(zhì)純化雙抗案例
填料： Butyl Chromstar HP
層析柱：Chrom-Screen 4.7ml；10cm
樣品：雙抗樣品(調(diào)節(jié)電導(dǎo)至130mS/cm)，樣品溫度25℃
平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
洗脫液：20 mM Tris, pH 7.4
保留時(shí)間：5min
圖1 層析圖譜
圖2 純化前后SEC-HPLC檢測圖譜(左圖：純化前；右圖：純化后)
小結(jié)：由層析圖譜和SEC檢測圖譜可以看出，Butyl Chromstar HP可將樣品純度由95.41%提升至98.8%，聚體含量則由4.59%下降至1.20%。
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