2010版藥典分子量及其分布方法

　　中國藥典2010年版二部附錄V H

　　Bolisuanna

　　Sodium Hyaluronate

　　（C14H20N Na O11）n

　　本品系雞冠或微生物 [馬疫鏈球菌]中提取的酸性黏多糖，由D-醛酸和N-乙酰基-D-氨基雙糖單位構(gòu)成的糖胺聚糖的鈉鹽。按干燥品計(jì)算，含應(yīng)為90.0%～110.0%。

　　由動物組織提取制得的制品應(yīng)去除或滅活病毒和傳染因子；由發(fā)酵法制備的制品應(yīng)控制有害的鏈球菌分泌物。

　　【性狀】 本品為白色或類白色的粉末或纖維狀物；有引濕性。

　　本品在水中微溶，在乙醇、或中不溶。

　　【鑒別】 （1）取本品適量，加水溶解并稀釋成每1ml中約含2mg的溶液，取2ml，加5%氯化十六烷基溶液0.1ml，即生成白色沉淀；加10%氯化鈉溶液0.5ml，沉淀溶解。

　?。?）本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜（光譜集1173圖）一致。（中國藥典2010年版二部附錄IVC）。

　　（3）本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（中國藥典2010年版二部附錄III）。

　　【檢查】 溶液的澄清度與顏色 取本品（相當(dāng)于干燥品0.10g），加入0.9%的氯化鈉溶液30ml，振搖使其慢慢混勻并溶解，溶液應(yīng)澄清，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄IVA），在600nm波長處的吸光度不得過0.01。

　　酸堿度 取本品適量，加水溶解并稀釋成每1ml中含5mg的溶液，依法測定（中國藥典2010年版二部附錄VIH），pH值應(yīng)為5.0～8.5。

　　吸光度 取本品適量，加水制成每1ml中含2mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄IVA）測定，在257nm的波長處，吸光度不得大于0.3；在280nm的波長處，吸光度不得大于0.3。

　　分子量與分子量分布 取本品5mg，加流動相至50ml，搖勻，室溫放置過夜，作為供試品溶液。另取4～5個已知分子量范圍1萬～500萬的聚苯乙烯酯鈉鹽對照品，同法制成每1ml中約含0.1mg的溶液作為系列對照品溶液。照分子排阻色譜法（中國藥典2010年版二部附錄V H），用多糖測定用凝膠柱Shodex SB-806HQ（8.0mm×300mm）或兩根柱串聯(lián)，以0.2mol/L氯化鈉溶液（取氯化鈉11.9g，0.1g，加純水使溶解并稀釋至1000ml）為流動相，柱溫35℃，流速為每分鐘0.5ml，示差折光檢測器。

　　取上述各對照品溶液100μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，由GPC軟件進(jìn)行普適校正

　　計(jì)算線性回歸方程，對照品K值為0.00018，α值為0.65；本品K值為0.00057，α值為0.75。取供試品溶液100μl，同法測定，用GPC軟件計(jì)算出供試品的分子量及分子量分布。本品重均分子量Mw應(yīng)不小于400 000，分布寬度Mw/Mn應(yīng)小于3.0（滴眼劑）；重均分子量Mw應(yīng)為600 000～1500 000，分布寬度Mw/Mn應(yīng)小于3.0（用于骨科）；重均分子量Mw應(yīng)為1,000 000～2，000 000，分布寬度Mw/Mn應(yīng)小于3.0（用于眼科手術(shù)）；重均分子量Mw應(yīng)不小于400 000，分布寬度Mw/Mn應(yīng)小于3.0（藥用輔料）。

　　鹽 取本品約10mg，用水2ml溶解，加2ml置沸水浴中水解6小時，取出放冷后，加試液5滴，不得立即產(chǎn)生沉淀。（由雞冠提?。?/p>

　　干燥失重 取本品0.5g，以為干燥劑，在60℃減壓干燥6小時，減失重量不得過20.0%（中國藥典2010年版二部附錄VIIIL）。

　　熾灼殘?jiān)?取本品0.5g，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄VIIIN），遺留殘?jiān)坏眠^18.0%。

　　重金屬 取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄VIIIH第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。

　　細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄XIE），每1mg含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.5EU（供眼內(nèi)注射用）；應(yīng)小于0.05EU（供關(guān)節(jié)內(nèi)注射用）。

　　微生物限度 取本品7.5g，加入含45000單位的無菌磷酸鹽緩沖液（pH7.2）150ml，冰箱4℃放置4小時后，取出放置，至室溫，42℃水浴振蕩30分鐘，制得1:20的溶液，作為供試品溶液。按照微生物限度檢查法（中國藥典2010年版二部XIJ）檢查，每1g供試品中細(xì)菌總數(shù)不得過100個，霉菌和酵母菌總數(shù)應(yīng)小于20個，不得檢出、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌。

　　【含量測定】 對照品溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的醛酸對照品60mg，精密稱定，置100ml量瓶中，用水溶解，并稀釋至刻度，搖勻；精密量取10ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

　　供試品溶液的制備 取本品約80mg，精密稱定，置100ml量瓶中，用水溶解，并稀釋至刻度，搖勻；用內(nèi)容量移液管量取10ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置25ml具塞試管中，依次分別加水至1.0ml，混勻，冰浴中冷卻，并在不斷振搖下緩緩滴加0.025mol/L硼砂溶液5.0ml，密塞，沸水浴加熱10分鐘（中間振搖一次），迅速冷卻，加0.125％的無水乙醇溶液0.2ml，搖勻，沸水浴中加熱15分鐘（中間振搖一次），冷卻至室溫。照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄IVA），以0管為空白，在530nm的波長處測定吸光度，以醛酸的μg數(shù)對相應(yīng)的吸光度計(jì)算回歸方程。

　　測定法 精密量取供試品溶液1ml，置25ml具塞試管中，自“冰浴中冷卻”起照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測定，由回歸方程計(jì)算醛酸的含量，乘以2.0675，即得。

　　【類別】 黏彈類物質(zhì)。

　　【制劑】 （1）注射液 （2）

　　【貯藏】 遮光，密閉，冷處保存。