在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
小鼠(PF-3)ELISA Kit
Mouse plaet factor 3, PF3 ELISA Kit
小鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒 | 進口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒 | 進口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒 | 進口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒 | 進口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒 | 進口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒 | 進口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)去除顆粒。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?span lang="EN-US">2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.