新城疫病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑檢驗方法 返回列表頁

新城疫病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑檢驗方法

廣州健侖生物科技有限公司

【產(chǎn)品名稱】
　　通用名稱：新城疫病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑檢驗方法

英文名稱：Newcastle disease virus Antibody Test Kit  (ELISA)

【包裝規(guī)格】48份/盒、96份/盒

【預(yù)期用途】雞新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus ,NDV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。本病主要特征是呼吸困難、嚴(yán)重下痢、粘膜和漿膜出血，病程稍長的伴有神經(jīng)癥狀。雞感染后，體內(nèi)會產(chǎn)生特異性抗體。檢測抗新城疫病毒抗體可作為該病疫苗免疫狀況及該病輔助檢測指標(biāo)。本試劑盒采用ELISA方法檢測雞血清中的特異性抗新城疫病毒抗體。本試劑靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

• 2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個月。
• 包被板開封后2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【適用儀器】

含450nm和630nm波長酶標(biāo)儀；37℃恒溫設(shè)備；可調(diào)微量移液器。

【樣本要求】

• 為取得佳實驗效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長菌以及嚴(yán)重溶血的樣品；
• 短期（7天）將進(jìn)行檢測的血清樣品可存放于2～8℃；如需長期保存，應(yīng)置于-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗方法】

• 洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。
• 樣本稀釋：用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。
• 加樣反應(yīng)：每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；zui后一次甩凈，拍干。
• 加酶反應(yīng)：除空白對照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物（1號液）1滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。
• 顯色反應(yīng)：加底物（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。
• 加終止液（6號液）1滴，以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。
•  

• 【參考值】

• Cut-off 值 (COV)=陰性對照平均OD值×2.1 (陰性對照孔OD值＜0.08時按0.08計)。
• 有效性判定：

• 空白對照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實驗無效）；

  陰性對照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實驗無效）；

  陽性對照孔OD值≥0.3（若小于0.3則實驗無效）。

  【檢驗結(jié)果的解釋】

  樣本OD值≥COV值時，判為新城疫病毒抗體陽性，

  樣本OD值＜COV值時，判為新城疫病毒抗體陰性。                         

  【檢驗方法的局限性】本試劑僅適用檢測雞血清。

  【注意事項】

• 包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時，應(yīng)平衡至室溫后，方可開封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。
• 滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時瓶身應(yīng)保持豎直。
• 瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。
• 孵育時，推薦使用水浴箱。如無水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。
• 用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，須小心使用。

健侖生物有以下檢測試劑：

新城疫病毒為副黏病毒科新城疫樣病毒屬（Avulavirus）的禽副黏病毒I型（APMV一1）。病毒存在于病禽的所有組織器官、體液、分泌物和排泄中，以腦、脾、肺含毒量zui高，以骨髓含毒時間zui長。在低溫條件下抵抗力強(qiáng)，在4℃可存活1～2年，一20℃時能存活10年以上；真空凍干病毒在30"C可保存30天，15℃可保存230天；不同毒株對熱的穩(wěn)定性有較大的差異。
該病毒對消毒劑、日光及高溫抵抗力不強(qiáng)，一般消毒劑的常用濃度即可很快將其殺滅，很多種因素都能影響消毒劑的效果，如病毒的數(shù)量、毒株的種類、溫度、濕度、陽光照射、貯存條件及是否存在有機(jī)物等，尤其是以有機(jī)物的存在和低溫的影響作用zui大。