南京舜瑪儀器設(shè)備有限公司

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關(guān)于細(xì)胞裂解的幾種方法

2012-6-5　　閱讀(5522)

　　細(xì)胞裂解的方法包括化學(xué)裂解法、酶裂解法和機(jī)械裂解法?；瘜W(xué)裂解法和酶裂解法通常是比較溫和的方法，通常不會(huì)使很多的DNA斷裂。這兩種方法（包括SDS和溶菌酶處理等）時(shí)提取以及純化DNA常用的方法。機(jī)械裂解可以均一的裂解細(xì)胞，同化學(xué)裂解相比，機(jī)械處理具有更高更強(qiáng)的裂解效率和更低的選擇性。機(jī)械處理可以更劇烈的和全面的裂解細(xì)胞，但會(huì)造成DNA的斷裂。
　　
　　一、機(jī)械裂解法主要有以下兩種：
　　
　　1、熱休克法（Thermalshock），既反復(fù)凍溶法，是一種常用的機(jī)械裂解方式，通常由冷凍和解凍兩部分組成（freezingandthawing）,。原理：由于細(xì)胞內(nèi)冰粒的形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。冷凍通常在液氮或-20°C冰上進(jìn)行，解凍可以在37、50、65或100℃水浴中進(jìn)行。熱休克比化學(xué)裂解更加溫和，但是很有效，有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細(xì)胞裂解率。
　　
　　2、超聲波處理（Ultrasonication）既利用超聲加熱的方法，把細(xì)胞破碎。但這種處理會(huì)導(dǎo)致DNA的斷裂，所以加熱不宜過(guò)劇烈，要設(shè)定好超聲時(shí)間和間隙時(shí)間，一般超聲時(shí)間不超過(guò)5秒，間隙時(shí)間大于超聲時(shí)間，這些都有利于保護(hù)酶的活性。bead-beating也是常用的機(jī)械處理方式，有報(bào)道指出bead-beating比熱休克和化學(xué)裂解的細(xì)胞裂解效果更好雖然DNA產(chǎn)量較高，但通常得到的DNA的片段較小。
　　
　　二、化學(xué)裂解和酶裂解法（在提核酸時(shí)聯(lián)合使用）
　　
　　主要是裂解液處理法，細(xì)胞裂解液的主要目的有以下幾種：（1）利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層，破裂細(xì)胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白變性使其穩(wěn)定；（4）抑制蛋白酶活性。
　　
　　主要根據(jù)不同的目的，裂解液的組成有所不同，主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取RNA或DNA時(shí)，我們主要是要充分裂解細(xì)胞，得到更多的核酸；如果我們的目的是蛋白，那要根據(jù)蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液，在提取蛋白后，再根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要復(fù)性蛋白等。以下是細(xì)胞裂解中常用試劑和其作用：50mMTris-HClpH7.4（緩沖體系），150mMNaCl（等滲體系），1mMPMSF（強(qiáng)大的蛋白酶抑制劑），1mMEDTA（變性劑和穩(wěn)定劑），5µg/mlAprotinin（蛋白酶抑制劑），5µg/mlLeupeptin（蛋白酶抑制劑），1%Tritonx-100（破壞細(xì)胞），1%Sodiumdeoxycholate（中度變性劑和蛋白溶解劑），0.1%SDS（強(qiáng)變性劑和蛋白溶解劑）。7M尿素，2M硫脲（可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。
　　
　　TAG：超聲波裂解，機(jī)械裂解法，化學(xué)裂解，酶裂解法


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