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堿性磷酸酶染液說明書
（Cell Alkaline Phosphatase Stain）
【檢驗(yàn)原理】
細(xì)胞中堿性磷酸酶（cAKP）在堿性的緩沖液中，催化底物水解，生成物進(jìn)而與一種穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，成不溶性的偶氮染料，沉著于有cAKP活性的部位。適用于血涂片、骨髓涂片、細(xì)胞涂片或爬片、冰凍切片以石蠟切片脫蠟梯度入水后。
【試劑組成】
可染 20～30 張涂片
本所附贈疏水膜1張。
【儲存條件及有效期】
本試劑盒應(yīng)置室溫密封保存，有效期6個月。
【試劑配制】
〇 底物應(yīng)用液的配制：臨用時將 1 支乙粉劑倒入 1 支甲溶劑中，用微量移液器取少許液體打入小離心管中，反復(fù)顛倒離心管，再用微量移液器將離心管中的液體轉(zhuǎn)移到瓶中，如此反復(fù)2～3次，使二者充分混合，*溶解后才可加入1支丙粉劑，再充分搖動使其*溶解，配成底物應(yīng)用液待用。底物應(yīng)用液要新鮮配制，用多少配多少。
【操作步驟】
① 固定：新鮮血涂片、骨髓涂片、細(xì)胞涂片或爬片、冰凍切片以及石蠟切片用固定液固定3 min左右。 （石蠟切片脫蠟梯度入水后不需固定） ② 加底物應(yīng)用液：固定后的樣本，滴加新鮮配制的底物應(yīng)用液蓋滿樣本部分，加蓋疏水膜，放置濕盒中，避光37℃孵育 15min，水洗。（此時覆蓋在樣本上的疏水膜會遇水掉下） ③ 復(fù)染：趁濕用復(fù)染液(蘇【染色結(jié)果】
血涂片及骨髓涂片的觀察： 選涂片中厚薄均勻的部位滴加香柏油用油鏡檢查，燈光適中。細(xì)胞核呈紫色， cAKP陽性者胞漿中出現(xiàn)紅至紅棕色顆粒，有些為棕褐色或咖啡色顆粒，其強(qiáng)度可按Kaplow記分法表示。
0 胞漿內(nèi)無紅色或無咖啡色；
1 彌散的紅色并偶見紅色或咖啡色顆粒；
2 彌散的紅色，有中等量的紅棕色顆粒；
3 顯著的紅色，有較多的紅棕色或咖啡色顆粒；
4 顯著的紅色并有粗大的紅棕色或咖啡色、深咖啡色顆粒充滿胞漿。 木素或者甲基綠，兩者取其一)染3min左右。水洗，鏡檢。
