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齊一生物科技（上海）有限公司 |  資料大小 |
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酵母細(xì)胞總蛋白提取試劑盒
試劑內(nèi)容：
試劑組成 （50 次）
酵母細(xì)胞蛋白裂解液 50ml
酵母細(xì)胞漂洗液 120 ml
酵母細(xì)胞懸浮 50ml
100×蛋白酶抑制劑 0.6ml
50% 甘油 10ml
說(shuō)明書(shū) 1 份
儲(chǔ)存條件：
本試劑在室溫干燥條件下，可保存 6 個(gè)月。酵母細(xì)胞懸浮、100×蛋白酶抑制劑和 50% 甘油 2-8℃保存。
概述：
1、總論：經(jīng)典的細(xì)胞蛋白質(zhì)分離流程由下述主要步驟組成：清洗組 織或細(xì)胞；裂解細(xì)胞；離心去沉淀獲得可溶性蛋白質(zhì)粗提物（可依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化特性特別的調(diào)配裂解緩沖液），目的蛋白質(zhì)是膜蛋白時(shí)用去垢劑處理；通過(guò)有機(jī)溶劑或鹽析等沉淀離心、層析、電泳等方法進(jìn)一步純化，得到目的產(chǎn)物蛋白。
2、本試劑盒用于從酵母細(xì)胞中快速、而溫和地抽提可溶性蛋白。采用本試劑處理，可以避免激烈的機(jī)械處理造成的氧化和熱度升高對(duì)目的蛋白的破壞作用。使用方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對(duì)酵母細(xì)胞的破壞。
注意事項(xiàng)：請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1) 酵母細(xì)胞懸浮液含有高活性消解酶類，即使在30℃作用60 分鐘即可獲得滿意的溶解。但在4℃保存下。存放時(shí)間久后，可能會(huì)出現(xiàn)酶活性下降，因此，當(dāng)出現(xiàn)這種情況的時(shí)候，用戶可以適當(dāng)添加消解酶至10mg/ml.
2) 若目的蛋白不穩(wěn)定，冰浴中孵育時(shí)間可以減少甚至取消，裂解液內(nèi)加入0.2 倍體積50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。
3) 4℃保存。
操作步驟：
1. 離心收集在選擇壓力下靜止培養(yǎng)的酵母培養(yǎng)物的沉淀（一般而言，12,000rpm 離心30 秒鐘，連續(xù)收集多次）酵母細(xì)胞, 按照每克酵母濕菌取用3ml 酵母細(xì)胞懸浮液的比例，于室溫將細(xì)胞懸浮起來(lái)后，然后放置于30℃保溫60-90分鐘。其間每20 分鐘顛倒混勻一次。（先懸浮起來(lái)，然后離心去除酵母細(xì)胞懸浮液）為了獲得高質(zhì)量的酵母蛋白，培養(yǎng)酵母的時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般為12-24個(gè)小 時(shí)。
由于培養(yǎng)的酵母菌液濃度不同,因此加入酵母細(xì)胞懸浮液后放置于37℃保溫的時(shí)間用戶可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在處理的時(shí)間上進(jìn)行調(diào)整,60分鐘只是一個(gè)參考值。
如果酵母細(xì)胞懸浮液不夠，也可以用濃度大于10mg/ml 的消解酶代替。
2． ．． ．離心除去酵母細(xì)胞懸浮液, 按照每克酵母細(xì)胞/5ml 酵母細(xì)胞漂洗液的比列，混懸酵母細(xì)胞樣品。
3. 離心除去酵母細(xì)胞漂洗液, 按照每克酵母細(xì)胞/5ml 酵母細(xì)胞蛋白裂解液和50ul 100× 蛋白酶抑制劑的比列，混懸酵母細(xì)胞樣品。
4．混旋或顛倒試管幾次后，20℃～37℃溫育10～20分鐘，同時(shí)輕輕搖動(dòng)。
5．細(xì)胞破碎后的勻漿液，根據(jù)您不同需要可以在12 000g 離心10min 到 100 000g 離心1h 范圍離心。沉淀?xiàng)壢?。上清即為含有目的蛋白質(zhì)的粗 提物。
