β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）試劑盒說明書                                   分光光度法 50 管/24 樣 
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定 
測定意義： 
淀粉酶負責(zé)水解淀粉，主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機地作用于
淀粉中的 α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。 
測定原理： 
還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上
述特性，鈍化其中之一，就可測出另一種淀粉酶的活力。 
β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）試劑盒說明書    需自備的儀器和用品： 
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、離心機、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。 
試劑的組成和配制： 
試劑一：50mL×1瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需 90℃加熱溶解后再用； 
試劑二：40mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加熱后再用。 
粗酶液提?。?nbsp;
組織：稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加入 1mL 蒸餾水，研磨勻漿；將勻漿
倒入離心管中，提取液在室溫下放置提取 15min，每5min振蕩 1 次，使其充分提??；3000g，
25℃離心 10min，取上清液加蒸餾水定容至10 mL，搖勻，即淀粉酶原液。 
吸取上述淀粉酶原液1mL，加入 4mL蒸餾水，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于（α＋β）淀
粉酶總活力的測定。 
血清（漿）等液體樣本： （1）直接檢測 α-淀粉酶。 （2）吸取淀粉酶原液 1mL，加入4mL蒸
餾水，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于（α＋β）淀粉酶總活力的測定。 
 
β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）試劑盒說明書    測定步驟： 
1、 分光光度計預(yù)熱 30min以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。 
2、 試劑一和試劑二 40℃預(yù)熱10min。 
3、測定操作表： 
試劑名稱（μL）  α-淀粉酶活力測定  總淀粉酶活力測定 
對照管  測定管  對照管  測定管 
淀粉酶原液  250  250     
70℃水浴 15min左右，冷卻 
淀粉酶稀釋液      250  250 
蒸餾水  250    250   
試劑二    250    250 
在 40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫 5min 
試劑一  500  500  500  500 
混勻，95℃水浴 5min，冷卻，在 540nm下測定吸光度，從左到右分別記為 A1、A2、A3和
A4。 
酶活性計算： 
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為 y=3.7215x -0.1778；  x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。  
2、α-淀粉酶活性
（1）按照樣本質(zhì)量計算 
單位定義：每 g組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為 1 個酶活力單位。 
α-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T 
=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W 
（2）按照蛋白質(zhì)含量計算 
單位定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為 1個酶活性單位。 
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T 
=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr 
（3）血清（漿）等液體樣本中α-淀粉酶活性計算 
單位定義：每 mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為1 個酶活性單位。 
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)=  [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(A2-A1＋
0.1778)   
3、總淀粉酶活性計算 
（1）按照樣品質(zhì)量計算 
單位定義：每 g組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為 1 個酶活力單位。 
總淀粉酶活性(mg/min//g 鮮重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣
總)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W 
（2）按照蛋白質(zhì)含量計算 
單位定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為 1個酶活力單位。 
總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷（V樣×Cpr）÷T 
=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr 
（3）血清（漿）等液體樣本中總淀粉酶活性計算 
單位定義：每 mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為1 個酶活性單位。 
總淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T 
=0.5375×(A4-A3＋0.1778) 
4、β-淀粉酶活性計算 
（1）按照樣本質(zhì)量計算 
單位定義：每 g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為 1 個酶活力單位。 
β- 淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鮮 重 )= 淀 粉 酶 總 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =[5.375×(A4-A3 ＋
0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W 
（2）按照蛋白質(zhì)含量計算 
單位定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為 1個酶活力單位。 
β-淀粉酶活性（mg/min/mg  prot）=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋
0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr 
（3）血清（漿）等液體樣本中β-淀粉酶活性計算 
單位定義：每 mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg還原糖定義為1 個酶活性單位。 
β- 淀 粉 酶 活 性 （ mg/min/mL ） = 淀 粉 酶 總 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =0.5375×(A4-A3 ＋
0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778) 
5：總淀粉酶稀釋倍數(shù)；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體
積，0.25 mL；V樣總：提取液總體積，10 mL；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本
質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，5min。