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主營(yíng)產(chǎn)品： abcam抗體,cst抗體,bd抗體,胎牛血清,bd基質(zhì)膠,感受態(tài)細(xì)胞,四季青胎牛血清 |
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2015-12-23 閱讀(916)
轉(zhuǎn)化效率是感受態(tài)細(xì)胞的一項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo),下文即感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率的檢驗(yàn)方法.
為確定 感受態(tài)細(xì)胞 的轉(zhuǎn)化效率,可將一定量的完整 質(zhì)粒 轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中,取一部分轉(zhuǎn)化的 細(xì)菌 ,涂布到選擇培養(yǎng)基上,可用菌落生長(zhǎng)單位/μg DNA ,按下面的方法計(jì)算感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率.計(jì)算公式：轉(zhuǎn)化效率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA的總量.
例如,取1μl(0.1 ng/μl)完整的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化100μl的感受態(tài)細(xì)胞. 向轉(zhuǎn)化反應(yīng)液中加入900μl 培養(yǎng)液 ,讓細(xì)菌恢復(fù)一小段時(shí)間,取100μl鋪板.培養(yǎng)過夜,產(chǎn)生1000個(gè)菌落.轉(zhuǎn)化0.1 ng DNA,用SOC稀釋到1000μl后,取1/10涂平板,則涂平板共用0.01 ng DNA 質(zhì)粒,所以轉(zhuǎn)化率＝1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg.
轉(zhuǎn)化效率1×10 6 cfu/μg DNA可滿足普通的亞克隆實(shí)驗(yàn)；1×10 7 cfu/μg DNA用于作更復(fù)雜的亞克隆,有*的DNA的轉(zhuǎn)化,T-克隆實(shí)驗(yàn)；構(gòu)建文庫(kù)和 突變 要求用的轉(zhuǎn)化的效率為>1×10 8 cfu/μg DNA.
