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流式抗體（熒光抗體）細(xì)胞染色步驟

2015-12-24　　閱讀(18207)

  • 染色緩沖液 （BSA）的配制： PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱備用。

     

     

  • 準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液：淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞。
  • 用 冰染色緩沖液 洗細(xì)胞2次，離心細(xì)胞，用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞，使終濃度為2×10 7 細(xì)胞/ml。
  • 各取50ul（10 6 細(xì)胞）細(xì)胞懸液到2個圓底的Ep管中。
  • 根據(jù)抗體說明書在其中1個Ep管中加入合適的抗體量，另外1個加入同型對照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻，以免細(xì)胞沉積）。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長染色時間。
  • 用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合的抗體，300×g離心5分鐘，每次離心后小心吸取上清。
  • 用適量染色緩沖液（如500ul）重懸細(xì)胞。
  •  流式細(xì)胞儀分析染色結(jié)果（不超過4小時）。如果暫時無法檢測，也可以將染色后的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定后，避光儲存在4度。固定后的細(xì)胞可以保存zui多一個星期。

 



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