泉州市藍圖生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA)、化學發(fā)光試劑盒(CLIA) |
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主營產(chǎn)品: 酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA)、化學發(fā)光試劑盒(CLIA) |
參考價 | 面議 |
僅供科研使用,不得用于臨床檢驗。
人睪酮(T)定量檢測試劑盒(ELISA)說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:人睪酮(T)定量檢測試劑盒(ELISA)
英文名稱:Human Testosterone(T) ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
48人份/盒,96人份/盒
【預期用途】
僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中人睪酮(T)的濃度。
【檢驗原理】
人睪酮(T)定量檢測試劑盒(ELISA)采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。在預包被抗人睪酮(T)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,加入人睪酮(T)校準品和待測樣本,再加入另一株HRP標記的人睪酮(T)抗原(酶標抗原),經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結(jié)合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-酶標抗原的免疫復合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,在終止液(2M 硫酸)作用下,zui終轉(zhuǎn)化為黃色,在酶標儀上測定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測樣品中人睪酮(T)的濃度負相關(guān)。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中人睪酮(T)的濃度。
【主要組成成分】
主要成分
組分 | 數(shù)量 | 主要成分 |
校準品 | 0.5ml/管*6管 | 抗原配制的6個濃度標準品 |
包被微孔板 | 96T | 預包被固相抗體 |
HRP標記抗體 | 6mL | HRP標記的檢測抗體 |
底物液A | 6mL | 過氧化脲工作液 |
底物液B | 6mL | TMB工作液 |
20×濃縮洗滌液 | 30mL | 含0.15%Tween20的PBS |
說明書 | 1份 | -- |
自封袋 | 1個 | -- |
不干膠 | 2片 | -- |
校準品濃度依次為:800、400、200、100、50、0 pg/ml。校準品已經(jīng)通過測試,結(jié)果表明HBs抗原陰性,HIV1、HIV2和HCV抗體陰性,由于不存在一種試驗方法能夠*保證沒有這些物質(zhì),本品必須按照具有潛在的感染性進行處理,處理過程應當遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
8、質(zhì)控品(可從藍圖生物科技產(chǎn)品研發(fā)系統(tǒng)中選擇)
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。
2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后,按照建議的條件保存,校準品、包被微孔板和HRP標記抗體,有效期為14天,其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀,如Thermo MK3,或者國產(chǎn)酶標儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前,所有的組分都要至少復溫30min,確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結(jié)晶產(chǎn)生,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1體積充分混合,混合后15分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質(zhì)控品和樣品,建議做復孔。
2、按前面試劑準備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設(shè)置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
5、除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
8、如此重復4次(共洗板5次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL,在酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
【檢驗結(jié)果的解釋】
檢測完成后,以標準品濃度做為縱坐標,對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用計算機軟件,采用四參數(shù)Logistic曲線擬合(4-pl),創(chuàng)建標準曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數(shù),才是樣品的zui終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用,過期產(chǎn)品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于zui高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果,檢測前,請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果,與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。
【產(chǎn)品性能指標】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣。
2、劑量反應曲線線性
校準品劑量反應曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.9900。
3、精密度
批內(nèi)精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
zui低檢出劑量小于10 pg/ml。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品,進行五次回收率評估,回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組人睪酮(T),與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
7、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存,有效期6個月。
【注意事項】
生物安全
1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護手套,實驗完成后*洗手。
技術(shù)提示
1、混合蛋白溶液時,避免起泡。
2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。
3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。
4、底物溶液為無色液體,保存過程中變?yōu)樗{色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序*,加入終止液后,藍色底物產(chǎn)物,會瞬間變?yōu)辄S色。
6、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,每個實驗室都有責任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別,進行廢物和污物的處理,同時要嚴格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。
【基本信息】
企業(yè)名稱:泉州市藍圖生物科技有限公司
生產(chǎn)地址:福建省泉州市泉港區(qū)界山鎮(zhèn)藍圖生物科技園A棟501室
【說明書批準日期及修改日期】
批準日期:2013.05.12
*次修改日期:2016.02.16