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細(xì)胞培養(yǎng)基的性質(zhì)

時(shí)間:2016/12/1閱讀:1255
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       細(xì)胞生物反應(yīng)器pH:多數(shù)細(xì)胞系在pH7.4下生長得很好。各細(xì)胞株之間,細(xì)胞生長pH值變化很小,一些正常的成纖維細(xì)胞系以pH7.4-7.7,轉(zhuǎn)化細(xì)胞系pH7.0-7.4更適合。據(jù)報(bào)道,上皮細(xì)胞可在pH5.5維持。為確定pH值,做一個(gè)簡單的生長實(shí)驗(yàn)或特殊功能分析

       細(xì)胞生物反應(yīng)器緩沖:培養(yǎng)基要在兩種條件下有緩沖作用:①開式皿中,CO2的稀放引起pH升高;②在高細(xì)胞密度下,轉(zhuǎn)化細(xì)胞系大量產(chǎn)生CO2和乳酸,引起pH下降。為了穩(wěn)定pH值,可以加入緩沖物。

盡管碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)在pH下的緩沖能力差,但由于它毒性小,成本低,對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用,它仍比其他緩沖系統(tǒng)用得多。HEPES在pH7.2-7.6下緩沖作用強(qiáng)得多,現(xiàn)在廣泛采用的濃度是10mmol/L或20mmol/L。

       細(xì)胞生物反應(yīng)器滲透壓:多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對滲透壓有很寬的耐受范圍。人細(xì)胞漿的滲克分子濃度是290mOsm/kg,因而推測這是體外人細(xì)胞的zui值,盡管這與其他細(xì)胞不同(如小鼠大約是310mOsm/kg)。實(shí)際上,多數(shù)細(xì)胞在260-320mOsm/kg之間*可行。

       溫度:除了溫度對細(xì)胞生長的直接作用之外,由于低溫下CO2溶解度增加,很可能由于緩沖劑的離子化和pKa上的變化,溫度也會影響pH。

       黏度:培養(yǎng)基的黏度主要受血清含量的影響,在多數(shù)情況下,對細(xì)胞生長沒什么影響。可是,每當(dāng)細(xì)胞懸浮液要攪拌時(shí)(如懸浮培養(yǎng)物被攪拌或者胰蛋白酶消化后解離細(xì)胞時(shí)),它變得重要了。若在攪拌條件下細(xì)胞受到損害,那么用羧甲基纖維素或聚已烯基吡咯烷增加培養(yǎng)基的黏度,可減輕細(xì)胞損害。在低血清濃度或無血清下,這特別重要。

       表面張力和泡沫:培養(yǎng)基的表面張力可用來促進(jìn)原代外植物貼附到介質(zhì)上,但很少用某種方法控制它。

        泡沫作用還不清楚。泡沫使蛋白質(zhì)的變性速率增加。如果泡沫達(dá)到培養(yǎng)容器的頸部,增加了污染的危險(xiǎn)。懸浮培養(yǎng)中,用含5%CO2的空氣在含血清培養(yǎng)基中鼓泡,會產(chǎn)生泡沫。加入硅油消泡劑降低表面張力,有助于防止泡沫生成。

 

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