詳細(xì)介紹
Pfu酶特征
• 克隆有 Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后,再經(jīng)三次過柱純化分離出來的一個(gè)約 90 KD 的重組蛋白。
• 具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力;有 3 '到 5 ‘外切酶的活性即糾錯(cuò)能力,通俗地說,出錯(cuò)的機(jī)率是普通 Taq 酶的十分之一。為了減少由 3′-5′ 外切酶活性引起的引物降解,閃晶公司強(qiáng)烈*在冰浴上添加所有的試劑并且在溫度達(dá)到 60 -65°C 時(shí)再加入 Pfu DNA 聚合酶以便進(jìn)行熱啟動(dòng)或者在冰浴上添加試劑后放在預(yù)熱到 95°C 的 PCR 儀上。
• 無 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性, 不能用于實(shí)時(shí)熒光PCR 。
• 無 3 ‘端加 A 的功能,產(chǎn)物為平端,如果需要做 T - A 克隆,需要做添 A 實(shí)驗(yàn)。
• 無外源核酸酶和細(xì)菌 DNA 污染。
• SDS - PAGE 檢測(cè),純度> 95% 。
• 延伸溫度 72 ℃ , Mg 2+ 濃度 2.0mM , dNTPS 濃度 0.2mM ,延伸速度為 600base/min ; Pfu DNA 聚合酶比 Taq DNA 聚合酶的延伸反應(yīng)速率低,因此閃晶公司*延伸反應(yīng)時(shí)間為每 kb 需 2 分鐘。
• 10 × PCR buffer: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 , 25℃ ), 1% TritonX-100 和 20mM MgSO4 。
• Storage buffer: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% 甘 油, 0.5% Nonidet -P40 和 0.5% Tween20 。
Pfu酶單位定義
在 74℃ 條件下, 30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTP 的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。反應(yīng)條件為: 50mM Tris-HCl (pH 9.0 , 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未標(biāo)記和標(biāo)記 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 終反應(yīng)體積為 50ml 。
Pfu酶 (大宗用戶價(jià)格面議,:)