人主要組織相容性復合體Ⅰ類ELISA測定試劑盒說明書

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中文名：人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA試劑盒

別名：人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA Kit

供貨商：上海樊克

產品規(guī)格：96T/48T

檢測波長：450 nm

96T使用方法：可用作標本90個，標準曲線6個；

46T使用方法：可用作標本46個，標準曲線6個；

主要成分：酶標板，試劑，標準品等。

預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關生物液體中的含量。

種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本

ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等。
適用范圍：僅供科研，不能應用于臨床

人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA分析檢測試劑盒包含以下各組分：

（1）結合物及標本的稀釋液；

（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（3）酶標記的抗原或抗體（結合物）；

（4）酶的底物；

（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），ELISA試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

技術原理：

（1）抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

（2）結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

（3）酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

（4）受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。

（5）此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

（6）加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作方法：

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

操作注意事項

1.  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2.  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3.  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4.  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5.  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6.  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7.  底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8.  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

人主要組織相容性復合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA定量檢測試劑盒性能：

1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.靈敏度：zui低檢測濃度小于10pg/ml。

3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。

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