恒溫擴增PCR Master Mix

  Allsheng恒溫擴增PCR Master Mix是一種即用型的恒溫擴增試劑盒，本試劑盒包含建立恒溫反應體系（除引物和模板之外）的所有組分。與目前廣泛應用的real-time qPCR技術相比，其需要四到六條模板特異性的引物以及具有鏈置換活性的Bst酶，在恒溫條件下1h內完成擴增；無需昂貴的熒光定量PCR儀；恒溫檢測方法具有特異性好，靈敏度高及檢測范圍廣泛等優(yōu)勢，可與real-time qPCR檢測技術相媲美。

交叉引物擴增技術（CPA）介紹

恒溫擴增技術是繼PCR技術后發(fā)展起來的一門新型的核酸擴增技術（Nucleic Acid Isothermal Amplification， NAIA），其擴增反應的全過程均在同一溫度下進行。

與傳統(tǒng)PCR技術相比，使得他們對擴增所需儀器的要求大大簡化，反應時間大大縮短，因而具有巨大的應用價值，成為分子診斷行業(yè)發(fā)展的熱點。

CPA擴增主要包含以下幾個步驟：

1. 交叉正向引物CPF中的PFs與模板DNA中PFa互補，啟動DNA合成，使得PRa被引入到所擴增的產物中；

2. 外圍引物DP1s與PFa前端DP1a序列互補，通過鏈置換型DNA聚合酶向前延伸，一邊置換CPF合成的能與CPR和DP2a結合的單鏈產物（結構3），一邊與模板DNA形成雙鏈產物（結構2）；

3. 在結構3中，DP2a通過鏈置換型DNA聚合酶向前延伸，置換出由CPR所延伸的單鏈產物（結構5），同時合成與步驟2中由CPF延伸所產生單鏈DNA形成雙鏈產物（結構4）,而結構5相對起始的DNA模板，多了PRs和PFs兩個片段序列；

4. 單鏈結構5中的3’端的PFa和PRs可分別與CPF中的PFs和CPR中的PRa互補結合， 可在鏈置換型DNA聚合酶的作用下延伸和置換出相應的單鏈產物。延伸產物相對結構5來說又增加了一個PFs區(qū)域（結構8）；

5. 因此，擴增引物CPF和CPR的不斷雜交和延伸，不僅使得結構5的長度不斷的加長,從而引入更多CPF和CPR 3’端互補區(qū)域，同時也置換出了各種可與CPF和CPR 3’端互補的單鏈產物；

6. 通過CPF和CPR的不斷雜交延伸和DNA聚合酶的鏈置換作用，使得DNA拷貝數(shù)不斷的增加，從而達到基因擴增的效果。

應用

這種新型的核酸恒溫擴增方法，其廣泛應用于細菌，病原微生物，寄生蟲以及病毒等的快速檢測。

特點

恒溫檢測方法由于其特異性好，靈敏度高，反應設備及檢測設備價格低廉等廣受科研工作者的親睞，是未來檢測技術發(fā)展的趨勢。

性能對比

使用Allsheng® 恒溫 PCR Master Mix(紅色)、S公司（綠色）以及D公司（藍色）提供的恒溫PCR Master Mix對對蝦白斑病毒（WSSV）進行實時定量PCR測定（左），模板使用0.1ng/μl對蝦白斑病毒基因組DNA。相同條件下，Allsheng®具有更好的擴增能力且重復性良好。

使用說明

請詳見說明書