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　　2',7'-二氯熒光素二乙酸酯 天津本生

　　中文名稱:2',7'-二氯熒光素二乙酸酯

　　英文名稱:2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate

　　別名: DCFH-DA

　　CAS No:4091-99-0 分子式:C24H16Cl2O7 分子量:487.29

　　MDL:MFCD00128955

　　規(guī)格:25mg/50mg/100mg/1g

　　外觀與性狀：白色粉末

　　溶解性：溶于DMSO (25 mg/ml)

　　保存條件：-20℃ 避光 干燥

　　包裝：25mg 50mg 100mg 500mg 1g in glass bottle

　　產(chǎn)品描述：

　　2',7'-二氯熒光素二乙酸酯 天津本生 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

　　一種細(xì)胞可滲透的非熒光探針。在細(xì)胞內(nèi)脫酯化的并可經(jīng)氧化轉(zhuǎn)化為具有強(qiáng)熒光的2′,7′-二氯熒光素。

　　應(yīng)用包括響應(yīng)氧化代謝的活性氧的靈敏快速定量;用于吞噬細(xì)胞中的氧化產(chǎn)物的微孔板檢測(cè);以及定量多孔髓樣分化測(cè)定。

　　細(xì)胞染色方案(僅供參考):

　　1.制備1-10mM DMSO儲(chǔ)備溶液。 應(yīng)將未使用的DMSO儲(chǔ)備溶液等分到單次使用的小瓶中并儲(chǔ)存在-20℃，避光。

　　2.在生理緩沖液(如PBS，HBSS，HEPES)中使染料的工作濃度為1-10μM。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定最佳工作濃度。

　　3.從生長(zhǎng)培養(yǎng)基中取出細(xì)胞，將染料工作溶液(來自步驟2)加入細(xì)胞中，并在室溫或37℃下孵育細(xì)胞5至60分鐘。

　　4.去除染料工作溶液; 用預(yù)熱的HBSS洗滌，加入預(yù)熱的HBSS或生長(zhǎng)培養(yǎng)基，在最佳溫度下孵育。 最佳孵育時(shí)間可能相差較大，因?yàn)橐恍┘?xì)胞類型通常表現(xiàn)出低水平的酯酶活性。

　　5.在將細(xì)胞暴露于實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)物之前，確定加載細(xì)胞樣品的基線熒光強(qiáng)度。

　　6.陰性對(duì)照應(yīng)評(píng)估如下：

　　A:檢查未染色的細(xì)胞在綠色發(fā)射范圍內(nèi)的自發(fā)熒光。

　　B:對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)，確定染料加載和處理后細(xì)胞的正向和側(cè)向散射不變。細(xì)胞尺寸的變化可能與處理或毒性反應(yīng)引起的起泡或收縮有關(guān)。

　　C:檢測(cè)有沒有誘導(dǎo)物的染料和緩沖液/培養(yǎng)基的無(wú)細(xì)胞混合物的熒光。在沒有細(xì)胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，熒光隨時(shí)間的逐漸增加可能與自發(fā)水解，大氣氧化或光誘導(dǎo)有關(guān)。

　　D:檢查已經(jīng)保存在生長(zhǎng)培養(yǎng)基或簡(jiǎn)單緩沖液中的未處理(對(duì)照)負(fù)載細(xì)胞的熒光。在染料加載孵育后，健康細(xì)胞應(yīng)表現(xiàn)出低水平的熒光，在實(shí)驗(yàn)期間相對(duì)穩(wěn)定; 然而，可以觀察到熒光逐漸增加(由于自動(dòng)氧化)或減少(由于細(xì)胞中的染料損失或光漂白)。 在沒有任何刺激或誘導(dǎo)的情況下，健康的未經(jīng)處理的細(xì)胞中的熒光突發(fā)可以指示細(xì)胞死亡或一些其他氧化事件的進(jìn)展。

　　7.可以用H2O2或叔丁基過氧化氫(TBHP)刺激陽(yáng)性對(duì)照至終濃度~100μM(基于細(xì)胞的敏感性和反應(yīng)增加或減少劑量)。

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