染料法PCR試劑盒

染料法PCR試劑盒 即 肺炎支原體熒光定量PCR檢測試劑盒（染料法）

DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
對上述處理好的樣本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL核酸提取液)，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
結(jié)果判定
在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明貝氏柯克斯體核酸陽性。
Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明貝氏柯克斯體核酸陰性。
如果Ct值>35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行貝氏柯克斯體 qPCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明貝氏柯克斯體核酸陽性；否則判為樣本陰性。
染料法PCR試劑盒注意事項(xiàng)：
初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。