Thermo Scientific 活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒是一種全套試劑盒，能夠通過與 Pak1 蛋白結合結構域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結合 Cdc42 GTPase。
活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒包含純化的 GST-Pak1 蛋白結合結構域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結合/洗滌緩沖液、抗 Cdc42 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細胞的裂解物進行驗證，已知該細胞系具有穩(wěn)健的 Cdc42 活性。
活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒的特點：
?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Cdc42 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結果
?經驗證—對 Cdc42 檢測進行功能檢測，以確保質量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細胞類型有效
應用：
? 追蹤細胞分化、遷移、分裂和細胞骨架重排期間的 Cdc42 GTPase 活化
? 研究絲狀偽足形成期間 Cdc42 的活化
? 監(jiān)測使用生長因子刺激后的 Cdc42 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Cdc42 活性的影響
使用經用于活化內源性 Cdc42 的 GTPγS 處理的細胞裂解物相對于經滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗證了活化 Cdc42 沉降和檢測試劑盒的活化 Cdc42 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結合活化形式的 Cdc42，在存在內源性 Cdc42 時產生強烈信號。GDP 處理使 Cdc42 進入 GDP 結合的非活化狀態(tài)，無論 Cdc42 蛋白水平如何均幾乎不產生信號。對該試劑盒進行了優(yōu)化，用于使用 HRP 結合型二抗（山羊抗小鼠 IgG，產品編號 31430）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學發(fā)光底物（產品編號 34080）進行 Western 印跡檢測。試劑盒所含成分均足夠進行 30 次沉降實驗。
Cdc42 背景：
Rho 家族 GTPase 具有許多細胞功能，包括細胞信號傳導、轉錄調節(jié)和肌動蛋白細胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細胞因子和黏附受體實現(xiàn)從質膜到細胞溶質的信號轉導。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質修飾來實現(xiàn)與質膜的黏附。Cdc42 活化導致肌動蛋白微絲聚合和絲狀偽足形成。
RhoGTPase 的 Cdc42 亞族與 Rho 和 Rac 家族相比未得到充分表征。Cdc42 和 Rac1 均通過受體激酶信號轉導活化，導致 SAPK 和 p38 應激激酶通路激活。中性粒細胞中的化學引誘物 fMLP 也激活 Cdc42。纖連蛋白激活 Cdc42 和 Rac1 以誘導細胞伸展，用 TNF-α 和 IL-1 刺激可導致肌動蛋白細胞骨架發(fā)生變化。Cdc42 和 Rac1 之間存在顯著的交叉串擾，因為它們在重疊的通路中起作用，在某些情況下，Cdc42 可能在信號轉導過程中在 Rac1 上游起作用。Cdc42 的某些主效應蛋白為 Pak1、N-WASP 和 IQGAP。Pak1 是一種參與 SAPK 應激通路中 JNK 活化的激酶。N-WASP 是誘導絲狀偽足形成的效應子，IQGAP 與 F-肌動蛋白微絲相互作用。在神經元分化中，Cdc42 在神經突增生中起積極作用。然而，GTPase 的 Rho 家族可在細胞信號轉導期間發(fā)揮激動作用以及在分化期間發(fā)揮拮抗作用。
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?通過特異性下游效應子測定小 GTPase 的激活
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
