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葡聚糖凝膠的性質(zhì)和作用
閱讀:3197 發(fā)布時間:2021-7-9葡聚糖凝膠指的是由一定平均相對分子質(zhì)量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚橋形式相互交聯(lián)而成,具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),應(yīng)用面廣的一類凝膠,國外商品名為Sephadex。交聯(lián)度的大小,可通過控制交聯(lián)劑(一般為環(huán)氧氯b烷) 和葡聚糖的配比以及反應(yīng)條件來控制。
性質(zhì):
1、化學(xué)穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應(yīng)避免使用。
2、物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。
產(chǎn)品用途
利用分子篩作用,進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定。
交聯(lián)葡聚糖的商品名為Sephndex,不同規(guī)格型號的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。
方法分類
1.乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2.無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
3.鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗至中性;
4.將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;
5.上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;
7.洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8.在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以
40cm/h用1M氫氧化na反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
儲運特性
1、未使用,室溫保存即可。
2、使用后保存方法如下:凝膠層析的載體不會與被分離的物質(zhì)發(fā)生任何作用,因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次后,由于床體積變小,流動速率降低或雜質(zhì)污染等原因,使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理,其方法是:先用水反復(fù)進行逆向沖洗,再用緩沖溶液平衡,即可進行下一次分離。對使用過的凝膠,若短時間保存,只要反復(fù)洗滌除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì),加入適量防腐劑即可;
3、若長期保存,則需將凝膠從柱中取出,進行洗滌、脫水和干燥等處理后,裝瓶保存。