灰黃霉素CAS： 126-07-8

方法名稱： 灰黃霉素原料藥－灰黃霉素－高效液相色譜法

應用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定灰黃霉素原料藥中灰黃霉素的含量。

本方法適用于灰黃霉素原料藥。

方法原理： 供試品加流動相溶解并稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測灰黃霉素的峰面積，計算出其含量。

試劑： 1. 乙腈

2. 甲醇

3. 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液

4. 磷酸

儀器設(shè)備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按灰黃霉素峰計算應不低于800。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 乙腈 甲醇=57 38 5，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.7±0.2

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備： 1. 對照品溶液的制備

精密稱取灰黃霉素對照品約50mg，置50mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于灰黃霉素100mg），置100mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理30分鐘，放冷至室溫，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45µm微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長254nm處測定灰黃霉素（C17H17ClO6）的峰面積，計算出其含量。

參考文獻： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005版，二部，p.192