斑馬魚模型評(píng)價(jià)保健品發(fā)育毒性與致畸性風(fēng)險(xiǎn)

利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)保健品發(fā)育毒性與致畸性風(fēng)險(xiǎn)

【評(píng)價(jià)原理】

斑馬魚胚胎在母體外發(fā)育，從合子期到孵化期僅72小時(shí)，且發(fā)育的完整過程均是透明的，利于實(shí)時(shí)觀察和檢測(cè)。斑馬魚幼魚長(zhǎng)3~4毫米，擁有6-384孔板的高通量檢測(cè)體系，可實(shí)現(xiàn)低費(fèi)-高效篩選。斑馬魚與人類基因同源性達(dá)到87%，用于保健食品的體內(nèi)快速評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可比性強(qiáng)。故可以利用斑馬魚早期各個(gè)階段的發(fā)育形態(tài)，準(zhǔn)確高效的確定保健食品暴露在胚胎中的毒性，廣泛應(yīng)用于保健食品的發(fā)育毒性與致畸性研究。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，在顯微鏡下觀察并記錄各濃度組織器官反應(yīng)及死亡情況，用來保健食品對(duì)斑馬魚的毒性，并對(duì)典型毒性器官進(jìn)行拍照。

【實(shí)驗(yàn)方案】利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)保健品發(fā)育毒性與致畸性風(fēng)險(xiǎn)

我們將受測(cè)試斑馬魚分成兩組，分別是正常對(duì)照組和保健食品組。其中正常對(duì)照組為標(biāo)準(zhǔn)稀釋水處理組，保健食品組按照既定濃度攝入了不同濃度的待測(cè)保健食品（待測(cè)保健食品通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。

在保健食品暴露過程中，每天觀察記錄各個(gè)濃度組斑馬魚的死亡情況，并及時(shí)挑除死魚。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)斑馬魚死亡情況并使用OriginPro 8軟件擬合數(shù)據(jù)曲線，獲得保健食品的較大非致死濃度（MNLC）和LC₁₀。

保健食品暴露一段時(shí)間后，我們在顯微鏡下觀察記錄斑馬魚身體各個(gè)指標(biāo)的情況并對(duì)典型毒性器官進(jìn)行拍照。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚發(fā)大非致死濃度（MNLC）和LC₁₀摸索數(shù)據(jù)擬合圖

可以看到，該保健食品的MNLC為313 μg/mL，LC₁₀為350 μg/mL。

圖2. 斑馬魚發(fā)育毒性與致畸性表型圖

H=Heart;J=Jaw;In=Intestinal tract;L=Liver;Y=Yolk sac;E=Eye

可以看到，保健食品組較正常對(duì)照組出現(xiàn)卵黃囊吸收延遲、心包水腫、體長(zhǎng)變短、眼變小和肝變形。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1. 該保健食品的MNLC為313 μg/mL，LC₁₀為350 μg/mL，誘發(fā)斑馬魚卵黃囊吸收延遲、心包水腫、體長(zhǎng)變短、眼變小和肝變形。

2. 本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該保健食品對(duì)斑馬魚有發(fā)育毒性與致畸性風(fēng)險(xiǎn)。