TCS SP8 DLS共聚焦顯微鏡

徠卡TCS SP8 DLS 結(jié)合光片與共聚焦技術(shù) Leica TCS SP8 DLS

將兩種成像系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)合二為一：使用 Leica TCS SP8 DLS (數(shù)字光片)，您可在顯微鏡上使用柔和的單平面照明實(shí)現(xiàn)*的共聚焦。通過研制出 TwinFlect 反光鏡，我們就能將共聚焦平臺(tái) Leica TCS SP8 變?yōu)楹?jiǎn)單易用的多功能光片顯微鏡。

我們轉(zhuǎn)向采用光片垂直布置設(shè)計(jì)。

黑腹果蠅眼睛綠色熒光蛋白表征 (3P3 催化劑) 的顏色編碼三維圖集。樣品來源：Nadja Dinges，Roignant Lab，IMB Mainz。

擴(kuò)展選件

● 通過單平面照明增強(qiáng)細(xì)胞活性

● 使用 sCMOS 攝像頭觀察快速實(shí)時(shí)過程

● 樣品處理簡(jiǎn)單，可進(jìn)行多位置實(shí)驗(yàn)

● 將共聚焦模式與光片顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，拓展新應(yīng)用領(lǐng)域

● 兩側(cè)同時(shí)照明，消除昏暗區(qū)域

● Leica TCS SP8 全系列始終能針對(duì)您的應(yīng)用找到理想成像方法

● 將共聚焦平臺(tái)變?yōu)楣馄@微鏡。隨時(shí)從 Leica TCS SP8 升級(jí)為 Leica TCS SP8 DLS

光片垂直布置—如何將光片技術(shù)引入共聚焦平臺(tái)？

光片顯微鏡通常需要在獨(dú)立系統(tǒng)中安裝的光學(xué)裝置，其中照明和檢測(cè)物鏡相互垂直布置。Leica TCS SP8 DLS 讓光片顯微鏡變得非常的簡(jiǎn)便。*的 TwinFlect 反光鏡裝置使照明光片偏轉(zhuǎn) 90 度，從而將照明和檢測(cè)光路集成到每臺(tái)倒置 Leica TCS SP8 的縱向軸中，同時(shí)又不犧牲共聚焦功能。

執(zhí)行和記錄觀察

成像需要光照，但光照過強(qiáng)會(huì)損傷細(xì)胞。光片顯微鏡是當(dāng)今柔和的成像方案，它可減少光毒性和光漂白造成的總體光損傷。這會(huì)自動(dòng)降低樣品活性。在發(fā)育生物學(xué)中，柔和光片成像尤其有幫助：其光照強(qiáng)度低，攝取快速，以便觀察果蠅胚胎等敏感性發(fā)育生物體，并以實(shí)時(shí)三維方式了解組織和器官的形成過程。

Low phototoxicity and specimen imaging in 3D: Development of Drosophila melanogaster over six hours. Probe: Light-sensitive RFP. 3D rendering. 150 µm z stack, 30sec/stack.

光片成像原理

光片顯微鏡對(duì)樣品進(jìn)行單平面照明，非常適合敏感樣品和快速生物過程的成像。由于不存在離焦激發(fā)，可將光毒性的影響局限于焦平面上。這表示您還可自動(dòng)獲得光學(xué)切片，并在光片下移動(dòng)樣品，從而實(shí)現(xiàn)樣品 3D 成像。

多色觀察

斑馬魚體側(cè)線 17 小時(shí)發(fā)育過程。樣品來源：Darren Gilmour，EMBL Heidelberg (斑馬魚 36hpf，CldnB:lynGFP/CXCR4B:nucTomato)

高速成像：斑馬魚跳動(dòng)的心臟，轉(zhuǎn)基因株系 flik1::EGFP。在 xytz 錄制之后進(jìn)行后期攝取對(duì)齊。錄制速度：120 幀/秒。來源：Emily Steed，Vermot Lab，IGBMC Strasbourg，F(xiàn)rance。

以的分辨率快速攝取圖像

您是否需要以三維方式觀察快速周期性生物過程？DLS 模塊就是您的。發(fā)現(xiàn)斑馬魚心臟的律動(dòng)之美。

使用 Leica TCS SP8 DLS，您可在兩個(gè)的 sCMOS 攝像頭之間任意選擇，以出色的分辨率和高達(dá) 120 幀/秒的幀頻進(jìn)行快速圖像攝?。簆co.edge sCMOS 攝像頭和 Hamamatsu 推出的 ORCA-flash 4.0 V2 攝像頭均已*集成在 LAS X LightSheet Wizard 中。

追蹤快速的周期性運(yùn)動(dòng)

LAS X軟件里新的 xytz 掃描模式可實(shí)現(xiàn)平面時(shí)間序列成像，并制成4D電影格式播放。該功能使得研究者可以追蹤那些無法在傳統(tǒng)Z軸堆積延時(shí)攝影模式下捕捉到的快速運(yùn)動(dòng)-比如斑馬魚心臟的跳動(dòng)。

眾多其他應(yīng)用優(yōu)勢(shì)

我們的光片模塊不僅僅作為共聚焦顯微鏡的功能性插件。Leica TCS SP8 和數(shù)字光片相輔相成，使您可隨意擴(kuò)展選件。您可在 LAS X 軟件中方便地切換共聚焦和光片模式，使用共聚焦技術(shù)輕松操控樣品。光轉(zhuǎn)換或致傷實(shí)驗(yàn)?zāi)酥梁罄m(xù)的柔和觀察將變得十分簡(jiǎn)便。

組合成像模式：在 Kaede 斑馬魚尾巴上的光轉(zhuǎn)換 (405 nm 激光) 和致傷 (多光子激光) 實(shí)驗(yàn)。移向傷口 (大片紅色區(qū)域) 的光轉(zhuǎn)換細(xì)胞 (小紅點(diǎn)) 的延時(shí)錄制。

被巨噬細(xì)胞愈合的傷口

4 日齡斑馬魚胚胎受傷后尾巴中的巨噬細(xì)胞 (mpeg1:Kaede)。樣品來源：Francesca Peri，EMBL Heidelberg。

始終選用正確的激光

Leica TCS SP8 共聚焦顯微鏡的所有可見激光都可用于光片成像。白光激光在光片實(shí)驗(yàn)中提供較大的靈活性，以便選擇正確的染料。在多色實(shí)驗(yàn)中，甚至可使用光譜相近的熒光基團(tuán)。

熟悉的樣品制備流程

Leica TCS SP8 DLS 采用垂直實(shí)驗(yàn)配置，樣品制備流程與您原先熟悉的流程相近。樣品封裝在傳統(tǒng)的玻璃底 Petri 培養(yǎng)皿中，可直接操作。您甚至還可在多個(gè)實(shí)驗(yàn)位置篩選多個(gè)樣品：利用共聚焦載物臺(tái)自動(dòng)化技術(shù)在同一實(shí)驗(yàn)配置下實(shí)現(xiàn)多樣品成像。的前提條件是：在樣品兩側(cè)需要留出放置 TwinFlect 反光鏡的空間。

Leica TCS SP8 DLS 的樣品制備。樣品包裹在玻璃底 Petri 培養(yǎng)皿的瓊脂中。必須將多余的瓊脂清除干凈，以便為 TwinFlect 反光鏡留出空間。

面向工作流的軟件設(shè)計(jì)

LAS X 顯微鏡軟件可逐步指導(dǎo)用戶完成數(shù)據(jù)記錄和評(píng)估。面向工作流的設(shè)計(jì)可幫助用戶高效使用儀器。校準(zhǔn)程序十分便捷，可精確創(chuàng)建光片。

樣品兩側(cè)照明設(shè)計(jì)：兩塊 TwinFlect 反光鏡相對(duì)放置，使它們均可被掃描器瞄準(zhǔn)，從而消除昏暗區(qū)域。要在較大視場(chǎng)下獲得清晰圖像，可通過 LAS X 軟件的 LightSheet Wizard 在線或離線融合選件將兩幅圖像融合在一起。

LAS X 軟件還有許多附加軟件包，您可根據(jù)自己的需求進(jìn)行定制。LAS X 三維可視化模塊可實(shí)現(xiàn)直觀剪輯、快速渲染和立體顯示，以新穎的方式交互處理三維數(shù)據(jù)。“拼貼圖"實(shí)驗(yàn)可幫助您觀察大片區(qū)域，而“標(biāo)記和查找"實(shí)驗(yàn)可在多位置設(shè)置下觀察多個(gè)相關(guān)區(qū)域。

優(yōu)質(zhì)的光學(xué)器件

適合各類應(yīng)用的優(yōu)質(zhì)物鏡是徠卡公司的標(biāo)志之一。垂直布置光片系統(tǒng)的核心由物鏡和 TwinFlect 反光鏡裝置構(gòu)成。您可根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求在兩種照明物鏡間任意選擇 - Leica HC PL Fluotar 2.5x/0.07 和 Leica HCX PL FLUOTAR 5x/0.15，以此創(chuàng)建所需的光片。要展現(xiàn)最微小的細(xì)節(jié)或獲取更大的視場(chǎng)，您可選擇我們的檢測(cè)物鏡：Leica HC FLUOTAR L 25x/0.95 W 或 Leica HC APO L 10x/0.3 W 水浸物鏡。

便捷的數(shù)據(jù)處理

3D 觀察過程會(huì)產(chǎn)生大量數(shù)據(jù)。LAS X 軟件中集成了多種工具，可方便地管理這些數(shù)據(jù)。使用在線融合工具，您可選擇保留原始數(shù)據(jù)，或僅保留融合圖像以節(jié)省磁盤空間。攝取時(shí)將自動(dòng)保存數(shù)據(jù)，而借助智能加載功能可方便地查看數(shù)據(jù)，直接訪問大延時(shí)數(shù)據(jù)集中的特定時(shí)間點(diǎn)或相關(guān) Z 軸堆棧。您可在管線中編譯所需的后期處理步驟，它們將自動(dòng)處理。

軟件控制的氣候室

軟件控制的氣候室可保持宜樣品的環(huán)境條件。用戶可使用 LAS X 環(huán)境控制模塊實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的全面控制。在實(shí)驗(yàn)過程中，可監(jiān)控所記錄的環(huán)境數(shù)據(jù)。您可在同一個(gè)界面設(shè)置所有環(huán)境條件，并運(yùn)行溫度曲線，例如，熱沖擊實(shí)驗(yàn)的溫度曲線。