反相柱是我們應(yīng)用泛的色譜柱類型， 反相柱鍵合相主要包括：C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。對(duì)于以上反相柱，我們?cè)谑褂眉熬S護(hù)的時(shí)候可以按照同樣的操作方式：

　　1、在條件允許情況下，在使用前對(duì)新色譜柱按照說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行柱效測(cè)試。以確保色譜柱的正常。

　　2、所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于60℃。

　　3、樣品

　　將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物，使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過(guò)濾。樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑（例如，流動(dòng)相為水，樣品溶劑為甲醇），為達(dá)到較好峰形，需要降低進(jìn)樣量（以250x4.6mm規(guī)格為例，小于10μL）。

　　4、流動(dòng)相

　　所有流動(dòng)相，特別是含有緩沖鹽的流動(dòng)相，當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制；如果使用了前日配制的流動(dòng)相，請(qǐng)確保流動(dòng)相pH值沒(méi)有變化，并確保流動(dòng)相沒(méi)有長(zhǎng)菌。 流動(dòng)相的pH值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內(nèi)使用。請(qǐng)盡量避免在常規(guī)流動(dòng)相中使用很高比例的水（>95%）作為流動(dòng)相，可能會(huì)造成保留時(shí)間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。如果使用高比例水或者水相為流動(dòng)相，建議使用親水柱。

　　5、色譜柱平衡

　　在進(jìn)行分析之前，請(qǐng)使用至少20倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱，以使色譜柱達(dá)到平衡。

　　色譜柱的柱體積可以通過(guò)以下公式估算：

　　V=0.68πr2

　　V為色譜柱柱體積（mL），r為色譜柱內(nèi)徑（cm），L為色譜柱長(zhǎng)度（cm）。

　　6、色譜柱保護(hù)

　　對(duì)于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請(qǐng)盡量使用在線濾器或保護(hù)柱，如果可能，使用SPE小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。

　　7、色譜柱清洗

　　常規(guī)清洗：

　　在儲(chǔ)存色譜柱之前，請(qǐng)使用至少20倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱（去除緩沖鹽），再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱（去除強(qiáng)保留成分，反相色譜通常使用甲醇或乙腈），然后使用合適的溶劑儲(chǔ)存色譜柱。

　　清洗強(qiáng)保留污染物：

　　使用如下試劑依次清洗色譜柱

　　20倍柱體積不帶緩沖鹽的流動(dòng)相；

　　20倍柱體積甲醇或乙腈；

　　20倍柱體積異丙醇；

　　20倍柱體積正己烷或；

　　20倍柱體積異丙醇；

　　20倍柱體積甲醇或乙腈。

　　8、 色譜柱保存

　　反相柱，保存溶劑通常是含至少30% 有機(jī)相的水溶液，也可在常規(guī)清洗后直接保存在有機(jī)相中。

　　如果需要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)藏，則需要使用較高比例的有機(jī)相（有機(jī)相比例至少大于50%）