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FRET肽

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更新時(shí)間：2021-06-18 09:52:20瀏覽次數(shù)：258次

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合肥合生生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

產(chǎn)地	國產(chǎn)	級別	食品級
證書	其他

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET肽）是一種非輻射能量躍遷，通過分子間的電偶極相互作用，將供體激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移到受體激發(fā)態(tài)的過程。此過程沒有光子的參與，所以是非輻射的。該分析方法具有快速、敏感和簡單等優(yōu)點(diǎn)。

詳細(xì)介紹

用于FRET試驗(yàn)的染料是可以相同的。但在大多數(shù)應(yīng)用中其實(shí)是使用不同的染料。簡單地說，熒光共振能量轉(zhuǎn)移是在供體基團(tuán)的激發(fā)狀態(tài)下由一對偶極子介導(dǎo)的能量從供體(染料1)向受體(染料2)轉(zhuǎn)移的過程。通常，供體（Donor）熒光基團(tuán)的發(fā)射光譜要與受體（Acceptor）基團(tuán)的吸收光譜有一定的重疊。當(dāng)這兩個(gè)熒光基團(tuán)間的距離合適時(shí)（10 – 100 Å)），就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。能量轉(zhuǎn)移發(fā)生方式依賴于受體的化學(xué)結(jié)構(gòu)：

a) 被轉(zhuǎn)化為分子的振動，即發(fā)生能量轉(zhuǎn)移熒光熄滅。(受體是猝光劑)
b) 發(fā)射更強(qiáng)于受體本身的特征熒光，造成次級熒光光譜的紅移。 (受體是熒光發(fā)射體)。
一個(gè)供體基團(tuán)（EDANS）和接受基因（DABCYL）勻被連接到一HIV蛋白酶的天然底物上，當(dāng)該底物未被切斷時(shí)，DABCYL可淬滅EDANS，從而檢測不到熒光。當(dāng)該底物被HIV-1蛋白酶切斷后，EDANS不再被DABCYL淬滅，隨即可檢測到EDANS熒光。蛋白酶抑制劑的有效性可憑借EDANS熒光強(qiáng)度的變化進(jìn)行監(jiān)測。
FRET肽是研究肽酶特異性的便利工具，由于其反應(yīng)過程可被連續(xù)監(jiān)測，為酶活性的檢測提供了一個(gè)便捷的方法。供體/受體對的肽鍵水解后產(chǎn)生的熒光可衡量納摩爾級濃度的酶活性。當(dāng)FRET肽是完整的，表現(xiàn)出的是內(nèi)部的熒光猝滅，但當(dāng)供體/受體對的任何肽鍵斷裂就會釋放出熒光，此熒光可被連續(xù)檢測，從而可對酶的活性進(jìn)行定量分析。
FRET 肽可作為各類酶研究的合適底物，比如：
肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的動力特征和功能特征。
對新的蛋白水解酶的篩選和檢測。
對多肽折疊的構(gòu)象研究。
以下是一些用于FRET的標(biāo)準(zhǔn)染料組合::
Fluorescein and Dabcyl:FAM/Lys(Dabcyl)
Fluorescein and Tamra: FAM/TAMRA
Methoxy-coumarin-acetic-acid(MCA) and 2,4-Dinitrophenyl(DNP): MCA/Lys(Dnp).
Ortho-aminobenzoic acid (Abz) and 2,4-dinitrophenyl (Dnp) or N-(2,4-dinitrophenyl)ethylenediamine (EDDnp): Abz/Tyr (NO2), Abz/EDDnp
Dabcyl and Glu(EDANS)

在蛋白酶的多肽底物內(nèi)經(jīng)共振能量轉(zhuǎn)移引發(fā)熒光猝滅的供體-接受對

		波長(nm)
猝滅劑	熒光團(tuán)	激發(fā)波	發(fā)射波
Dabcyl Dansyl DNP DNP DNP Tyr (NO2)	Edans Trp Trp MCA Abz Abz	336 336 328 328 328 320	490 350 350 393 420 420

常規(guī)RET供體-接受對的福斯特臨界距離（Forster Critical Distance）

Donor	Aceptor	Forster Distance (Nanometers)
Tryptophan IAEDANS (1) BFP Dansyl Dansyl CFP CF (3) Fluorescein Cy3 GFP BODIPY FL (4) Rhodamine 6G FITC B-Phycoerythrin Cy5	Dansyl DDPM (2) DsRFP FITC Octadecylrhodamine GFP Texas Red Tetramethylrhodamine Cy5 YFP BODIPY FL (4) Malachite Green Eosin Thiosemicarbazide Cy5 Cy5.5	2.1 2.5-2.9 3.1-3.3 3.3-4.1 4.3 4.7-4.9 5.1 4.9-5.5 >5.0 5.5-5.7 5.7 6.1 6.1-6.4 7.2 >8.0